辣根过氧物酶标记小鼠IgG

辣根过氧化物酶标记凝聚素的组织化学染色程序

辣根过氧化物酶标记凝聚素的组织化学染色程序       1．组织切片脱蜡处理等同前；       2．流水冲洗5分钟，3％H2 O2 孵育10分钟(阻断内源性过氧化物酶，避免假阳性)；       3．PBS漂洗3次，每次5分钟；       4．1％牛血清白蛋白孵育，室温20分钟，移去多余液体；       5．加入PBS稀释的辣根过氧化物酶―凝集素，置湿盒内孵育。室温1．5小时；       6．PBS漂洗3次．每次5分钟；       7．呈色  DAB

Western-blot实验操作手册

的说明书，按照适当比例稀释辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗。 二抗需根据一抗进行选择，例如，一抗是小鼠来源的IgG，则二抗需选择抗小鼠IgG的二抗，如辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L)。 7. 蛋白检测(Detection of proteins)： 参考相关说明书，使用ECL类试剂来检测蛋白。 压片可以采用专用的压片暗盒进行。 洗片时可以使用X光片自动洗片机。如果没有自动洗片机，可以用显影定影试剂盒自行配制显影液和定影液进行手工

二抗如何选择-论一抗与二抗种属及类型区别

化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等）、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于Western Blot和ELISA，最常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用Biotin/Avidin检测