辣根过氧化物酶标记牛血清白蛋白

HRP (辣根过氧化物酶) 标记抗体流程

1.         8 mg 辣根过氧化物酶放入1 ml玻璃瓶，加入1 ml双蒸水溶解，液体呈棕色。 2.         放入一个磁力搅拌子，电磁搅拌同时逐滴缓缓加入新配制的 NaIO4 0.2 ml，室温下继续搅拌40 min，液体呈现草绿色。 3.         将全部溶液用滴管装入反复用去离子水冲洗的透析袋中，4 oC 对1  mM pH 4.4的NaAc透析过夜，中间换液3－4次，每次300 ml，溶液最终呈浅棕色。 4.        

辣根过氧化物酶（HRP）

。但可以一纯酶溶液在10mm光径403nm波长下的吸光度来计算酶浓度[1％(W/V)酶溶液吸光度为22.5，浓度为227umol/L]。纯HRP干燥贮存于–20oC可保持稳定，使用1.36 mol/L甘油、10mmol/L磷酸钠、30umol/L牛血清白蛋白和20umol/L细胞色素C(pH 7.4)溶液作为基质冷冻保存，可使酶结合物稳定数年。HRP对热及有机溶剂的作用比较稳定，用甲苯与石蜡切片处理或用纯乙醇或l0％甲醛水溶液固定做冷冻切片，均不能使其活性改变。氰化物或硫化物在10–5～10–6mol/L

辣根过氧化物酶 horseradish peroxidase

缩写为FRP．为过氧化物酶之一种，含于辣根（ horseradish）中。 1941年 F· Thcorell曾提取其结晶。将之吸入细胞或注入之后，以 3， 3′ -二氨基联苯（ 3， 3′－ diaminobenzidine）为底物进行作用时，在光学或电子显微镜下可以看到一定的标记。最早为 W． Straus（ 1959）曾用以鉴别吞噬小体 Ph-agosome． K． Kristensson和 G． Olsson，（ 1974）在对利用轴突内逆行运输的神经元、轴突分支的着染，并而用于