- ¥2490
- 联迈生物
- LM16-64700
- 中国/上海
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
ESBL-Klebsiella pneumoniae
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
-20度
- 规格：
50次
中文名称：超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌LAMP试剂盒
英文名称：ESBL-Klebsiella pneumoniae
规格：50次
运输：低温
保存：-20度
有效期：一年
货期：一周
产品及特点
1.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
2.荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。
3.提供阳性对照，便于分析实验结果。
4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳，本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
1.标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
3.先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
1.在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
2.换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
3.换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
4.NC 管中不加任何阳性对照。
5.从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值， 并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
一．PCR 检测（20 μL 体系）
1.在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
建议 PCR 反应参数（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）
3. 数据采集
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
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文献和实验CLSI推荐需氧菌耐药表型总结如下：CLSI推荐的需氧菌耐药表型革兰阳性菌耐药表型分为葡萄球菌属、肠球菌属、肺炎链球菌属三大类。葡萄球菌属包括青霉素耐药和ß-内酰胺酶、甲氧西林/苯唑西林耐药、万古霉素的耐药性，诱导性克林霉素的耐药；肠球菌属为青霉素/氨苄西林耐药、万古霉素抗药、高水平氨基糖苷耐药；肺炎链球菌有青霉素和第三代头孢菌素耐药。革兰阴性菌耐药表型包含超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶、碳青霉烯酶。CLSI推荐预测基因型药敏试验方法革兰阳性菌耐药表型检测方法革兰阳性菌耐药表型分为葡萄球菌属、肠球菌
因素是近年来大量使用超广谱抗生素、万古霉素和口服万古霉素的结果。 1．青霉素/氨苄西林耐药性：肠球菌β-内酰胺酶的产生很少，只有约10％。纸片药敏试验可以准确地检测出有低亲和力青霉素结合蛋白(PBPs)改变的菌株，但不能可靠地检出产β-内酰胺酶的菌株。对这些少见的产β-内酰胺酶的菌株最好用以头孢硝噻吩为底物的直接β-内酰胺酶试验检测。但作药敏试验的菌株仅选自血液、脑脊液等无菌部位分离的菌株。肠球菌对青霉素/氨苄西林产生耐药性，主要是由于低亲和力青霉素结合蛋白(PBPs)的产生和细胞
ESBLs是英文Extended-Spectrum β-lactamase的缩写，中文意思是超广谱β-内酰胺酶，它是当前抗生素出现的新的耐药趋势之一。 目前大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、肺炎克雷伯氏菌是最常见的产ESBLs菌株的细菌，其次，阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸菌、铜绿假单孢菌也可出现产ESBLs菌株的细菌。 肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和大肠埃希菌中ESBLs检测的筛选与确证试验 方法
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