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文献和实验一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用
RT-PCR 和 qPCR 是大多数实验汪在科研道路上需要做的实验，大家看到这儿一定不以为意，这不就是两个简单的小实验，看两次 protocol，后面都不需要操作指南也能记住步骤的。可是…记住了实验步骤就真的等于能做好实验？能得到想要的数据、漂亮的曲线吗？ 看似简单的实验，实则暗流汹涌，稍不注意的地方就可能有旋涡把实验前进的小船打翻，要不怎么会有那么多人为此悲催的实验结果整日愁眉苦脸，屡战屡败，屡败屡战……最后还是得战战战！ 其实，多注意点小细节就可能帮助实验汪们减轻这样的苦恼，少做
Methods for microbial DNA extraction from soil for PCR amplification
Amplification of DNA from soil is often inhibited by co-purified contaminants. A rapid, inexpensive, large-scale DNA extraction method involving minimal purification has been developed that is applicable to various soil types (1). DNA
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