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酵母菌SD-GAL/RAF培养基

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    • 酵母双杂交的实验步骤【分享】

      酵母细胞。 3. 构建DNA-BD/靶蛋白质粒pLexA-X,作为钓饵(bait)。 4. 将上述钓饵质粒pLexA-X转化EGY48(p8op-LacZ)细胞株,用SD/-His/-Ura筛选;并用固体诱导培养基SD/Gal/Raf/-His/-Ura检测此DNA-BD/靶蛋白是否具有直接激活报告基因的活性,以及对酵母细胞是否具有杀伤毒性。 转化质粒 选择培养基 克隆生长情况 说 明 (含有Gal/Raf) pLexA-Pos SD/-His,-Ura

    • 酵母双杂交实验项目操作及心得体会

      ;。 ⑥ 因pGBKT7含Kan+抗性基因,在Kan+抗性平板上筛选阳性克隆。 ⑦ 测序验证CaM与gal4 DNA 结合功能区融合,插入序列读框正确、无碱基突变。 2.pGBKT7 – CaM转化酵母菌Y2HGold 将pGBKT7- CaM采用PEG/LiAc法转化酵母菌Y2HGold,涂布于SD – Trp固体培养基上,30° C 3-5天,菌落长出。 进行CaM自激活鉴定及毒性测定。 3.龙须菜高温胁迫表达cDNA文库

    • 酵母双杂交实验操作步骤大全

      1-2天,含有HIS3编码序列的BD-靶质粒在含有外源His培养基中,将以10%-20%左右的频率随机丢失。 (2)将上述克隆,转铺固体培养基SD/-Trp/-Ura,30°C孵育2-3天。 (3)再挑取生长的单克隆,转入SD/-Trp/-Ura和SD/-His/-Trp/-Ura培养基中,筛选His表型缺陷的克隆,即得到只含有AD-文库杂合子的重组子。 (4)将His表型缺陷的克隆转化固体诱导培养基SD/Gal/Raf/-Trp/-Ura,以验证AD-文库能否直接激活报告基因的表达,弃

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