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糖尿病视网膜病变(DR)大鼠模
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武汉云克隆动物有限公司
糖尿病视网膜病变(DR)大鼠模型
只
来源:链脲佐菌素(STZ)导致糖尿病,并诱导视网膜病变
模式动物品系:SPF 级SD大鼠,雄性,8 周
实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组
实验周期:8~10 weeks
建模方法
适应性饲养1周后进行建模。糖尿病组建模前禁食16h,称重空腹体重,尾静脉取血测定血糖浓度,一次性腹腔注射链脲佐菌素STZ(65mg/kg),72h、96h、120h后应用稳步血糖测定仪检测随机血糖,测定体重,观察一般情况如体型及毛发颜色变化。每组取尾静脉血测量血糖,连续3次血糖≥16.7mmol/L,并出现典型的“三多一少”症状者,即可确定为糖尿病小鼠。健康对照组将STZ改为等体积生理盐水,其它步骤相同。取材:造模后6周处死,取左眼及右眼视网膜。制备视网膜消化铺片:大鼠麻醉后断头处死,取眼球,固定24~48h,自睫状体后部近锯齿缘剪开巩膜,去掉眼晶状体和玻璃体,将眼后段平均分成3份, 在水中轻轻漂取视网膜;清水漂洗2~3h。将视网膜放人用3%胰蛋白酶消化溶液中,在37°C恒温箱中孵育2~3h,将视网膜轻轻移人蒸馏水中,轻轻吹打,使残余的视网膜神经成分及内界膜完全脱去,剩下一层透明的视网膜血管网,移到载坡片上尽量铺平,自然干燥。
应用:用于研究糖尿病视网膜病变的发生过程和治疗药物
模型评价
1.视网膜血管染色
将模型小鼠与对照组健康小鼠颈椎脱臼处死,迅速摘取眼球,眼球置于PBS中小心、快速地将视网膜分离出来,以视乳头为中心做个放射状切开,将视网膜平铺铺片,进行ADP酶血管染色。对照组视网膜血管自视盘发出,向四周呈放射状均匀分布,管径较粗,分支良好,能分辨出深浅两层血管网。模型组视网膜中央血管见无灌注区,血管减少,毛细血管丧失。
2.视网膜HE染色
将模型小鼠与对照组健康小鼠颈椎脱臼处死,迅速摘取眼球,固定。完成固定后,流水冲洗,于距齿缘后0.5mm处剪开眼球壁,小心地去除角膜、眼前节和玻璃体,切取视网膜组织,制备石蜡切片;进行HE染色。
3.视网膜消化铺片的免疫组织化学检测;
在制备视网膜铺片后,进行IHC检测。
4.QPCR检测:PI3K、Akt-1 mRNA水平
5.WB定性检测:PTEN、BAD;
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