- ￥2490
- YBio/钰博生物
- YB767830y-14
- 中国
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Mycobacterium marinum SYBR qPCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
海鱼分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒
Mycobacterium marinum SYBR qPCR Kit
产品及特点 Mycobacterium marinum SYBR qPCR Kit
海鱼分枝杆菌（Mycobacterium marinum）感染，又称游泳池肉芽肿，多
见于儿童及青年，好发于四肢易受外伤部位，如肘、膝及鼻部等。于损伤后 3 周
出现单发红色丘疹，缓慢长大为结节，偶尔发生溃疡，有叩击痛。一般在几个月
至 2-3 年内自然愈合。荧光定量 PCR 是检测传染性疾病的主流技术，本产品就
是以染料法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测海鱼分枝杆菌的试剂盒，
它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 特异性高，引物根据海鱼分枝杆菌高度保守区设计，不会扩增其他细菌。
3. 引物和扩增体系经过优化，灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。
4. 提供无传染性的 PCR 阳性对照，便于区分假阴性样品。
5. 一管式操作，荧光 PCR 检测，不容易产生环境污染。
6. 本产品只能用于科研，本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×qPCR MagicMix | 500 μL（棕色管） |
| 试剂二 | 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 试剂三 | 海鱼分枝杆菌染料法 qPCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 | 海鱼分枝杆菌染料法 qPCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL（黄盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输、-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、制备标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，
本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（其浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。本试剂盒免费赠送 20 次免DNA 提取的天净沙核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。
三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果进行定量分析，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线样品。如果做定 性分析，则 6 个标准曲线样品只选一个做（可以选 4 号，其余样品不变）。 以下只介绍定量分析的反应设置。
10. 在标记管中按下表加入各成分：
| 成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性 对照管 | PCR阳性对照管（2-7 管） |
| 2×qPCR MagicMix | 10μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 海鱼分枝杆菌染料法 qPCR引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| N+2 待测样品 cDNA 模板 | 6 μL | - | - |
| 自备超纯水 | - | 6 | - |
| 第 7 步所得 PCR 阳性对照 稀释液（2-7 号） |
- | - | 各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）。
四、荧光定量 PCR 反应参数
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 （40个循环） |
95℃ | 15 sec |
| 60℃ |
1 min，（采集 SYBR 通道的荧光信号） |
|
| 按仪器预设程序进行熔解曲线分析 | ||
五、数据处理
12. 设定 60℃-96℃范围的融解曲线分析，排除假阳性。
13. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
14. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。
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