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文献和实验实验原理 免疫电泳又称为γ球蛋白电泳或免疫球蛋白电泳技术,这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白IgM,IgG,IgA含量水平的实验方法。在这项实验技术中,首先利用蛋白质的分子量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离,然后将特异性的抗体引入到与电泳方向平行的凹槽中,在抗原和抗体的扩散过程中,抗原和抗体适当比例的结合会导致沉淀的产生。0.85%盐不仅可以终止扩散过程也可用于洗去未结合的蛋白,抗原和抗体结合所形成
一类抗原决定簇,也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。二、免疫动物供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类,常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。动物的选择常根据抗体的用途和量来决定,也与抗原的性质有关。如要获得大量的抗体,多采用大动物;如要是获得直接标记诊断的抗体,则直接采用本动物;如要获得间接的标记诊断用抗体,则必须用异源动物制备抗体;如果难以获得的抗原,且抗体的需要量少,则可以采用纯系小鼠制备;一般实验室采用的抗体,多用兔和羊制备。免疫用的动物最好选择适龄的健康
中 4.5 室温下轻轻混合摇动2-4小时,或4`C过夜,如需测定结合效率此步骤结束后取少量溶液待测。用20ml的偶联缓冲液洗介质一次。4.6 加入15m l 1% BSA 溶液室温下孵育2小时或4`C过夜。4.7 用磷酸盐缓冲液洗涤介质3次以上,每次15ml以上 h.4.8抗原固相化完成,可用于纯化。4.9 若不立即使用或者使用后,用20%的乙醇封存。 5.抗血清的纯化和保存 5.1抗血清用PBS等体积稀释,5000-10000r/min离心15分钟,取上清.5.2用10倍体积的PBS清洗抗原亲和
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