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文献和实验);蒸馏水;烧杯(400-600ml);加样枪(5-100μl)。 实验步骤 1. 准备琼脂糖凝胶 将琼脂和电泳缓冲溶液混合放入90℃水浴加热至溶化,制成1%琼脂,将琼脂在冷却前铺在水平玻璃板上,待冷却至室温后,按图用内径4毫米的打孔器打孔及制作凹槽。 2. 电泳 将用电泳缓冲溶液稀释的4%-5%的抗原用滴管小心放入小孔中,将胶板放入电泳槽中并用润湿的滤纸将胶板和电泳槽中的缓冲溶液相连。盖上电泳
中 4.5 室温下轻轻混合摇动2-4小时,或4`C过夜,如需测定结合效率此步骤结束后取少量溶液待测。用20ml的偶联缓冲液洗介质一次。4.6 加入15m l 1% BSA 溶液室温下孵育2小时或4`C过夜。4.7 用磷酸盐缓冲液洗涤介质3次以上,每次15ml以上 h.4.8抗原固相化完成,可用于纯化。4.9 若不立即使用或者使用后,用20%的乙醇封存。 5.抗血清的纯化和保存 5.1抗血清用PBS等体积稀释,5000-10000r/min离心15分钟,取上清.5.2用10倍体积的PBS清洗抗原亲和
一、多克隆抗体的概念抗原刺激机体,产生免疫学反应,由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白,这就是免疫球蛋白,这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体(Monclone antibody)。由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是多克隆抗体;除了抗原决定簇的多样性以外,同样
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