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- 信帆生物
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- 2025年07月11日
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信帆生物
简单介绍:检测血浆、血清、组织、细胞等样品中还原型谷胱甘肽(GSH)含量。
注意事项:比色法,显色底物与GSH反应,生成黄色化合物,分光光度法检测410nm处吸光度,进而计算出还原型谷胱甘肽(GSH)含量。
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文献和实验L 1.84 mol•L-1三乙醇胺triethlene diamine以中和样液，加入50 μL 10% 乙烯吡啶Polyvinyl pyridine （用70% 乙醇配制），25℃水浴1 h，以除去GSH，到时加入706 mL 50 mmol•L-1磷酸缓冲液，pH 7.5，内含2.5 mmol•L-1 EDTA，加入20 μL 10 mmol•L-1 NADPH 和80 μL 12.5 mmol•L-1 DTNB（二硫硝基苯甲酸），混匀，25℃保温10 min，到时加入20μL 50 U•mL
「参考值」 高铁血红蛋白还原75%以上。 「临床意义」 红细胞内6-磷酸葡萄糖脱氢酸酶（G-6PD）在磷酸戊糖旁路糖代谢中能使6-磷酸葡萄糖变为6-磷酸葡萄糖酸，同时使三磷酸吡啶核苷（TPN）变成还原型三磷酸吡啶核苷（TPNH），TPNH可使氧化型谷胱甘肽（GSSG）变成还原型谷胱甘肽（GSH）并使高铁血红蛋白（HbFe+++）还原成低铁血红蛋白（HbFe++）。本试验用亚硝酸钠使HbFe++氧化为HbFe+++（暗棕色）以美蓝的递氢作用加强磷酸戊糖旁路的糖
buffer)。 随后以 5-7 ml/min 将酶稀释液注入预装柱中，4℃ 下孵育 12-16h。先洗脱的是酶切后的无标签目标蛋白。 再用含 10mM 还原型谷胱甘肽的 buffer 可以将含 GST 标签的所有组分洗脱。 结语 柱上酶切以其灵活快速的特点简化了我们的实验过程。选择合适的内切酶及构建相应的氨基酸识别序列是成功酶切的关键。 Cytiva 提供一个全流程 GST 标签融合蛋白解决方案，包含 pGEX 系列
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