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- 信帆生物
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- 2025年07月13日
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信帆生物
简单介绍:检测醋酸纤维薄膜上的蛋白质，也称作洗脱液。适用于丽春红S染色后的洗脱。
注意事项:主要由氢氧化呐等组成。
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文献和实验一、所需试剂 1. 2%丽春红S浓贮存液（3-羟基-4-[2-磺基-4-硫代-苯偶氮基]-2，7-萘二磺酸）：溶于30%三氯醋酸和30%磺基水杨酸中。贮存液可在室温下稳定存放1年以上。 2. PBS。 二、操作步骤 1. 在染色之前，先配制丽春红S的应用液。即将2%的丽春红S浓贮存液用1%醋酸1:10稀释即成为应用液（注意：如果使用硝酸纤维膜，须将丽春红S应用液更换为用水1:10稀释）； 2. 用丽春红S应用液将PVDF膜洗1次； 3. 加入新鲜稀释的丽春红S应用
转印后切取印迹膜 有时转印后需将印迹剪成较小的片状进行单独处理。单个泳道可以泳动同一样品，待彼此分开后，可用不同的抗体并列检测。如以电泳方向剪膜，就可在同一样品中检测不同分子大小的抗原。为了简便而精确地找到泳道，电泳之后用丽春红S（Ponceaus S）或印度墨汁对印迹膜进行染色，便可很快确定待测蛋白质的位置并将其剪下。表表明两种染料的的适用范围及优缺点，用丽春红S染色的优点是操作简便，价廉和具有可逆性，在封闭过程中，染色易消褪，且不干扰进一步的检测
电泳1.5小时， 0.8mA/cm2 膜。 6．关闭电源，将尼龙膜取出，置塑料盒中用丽春红S染色约5分钟，回收丽春红S，然后用蒸馏水洗去背景染料显色，室温稍干燥后用铅笔描下 Marker所在位置，然后用PBST浸泡几次，完全洗去丽春红S染料（4）。 〈二〉封闭 7．将膜放入塑料盒中，加入20mL封闭液，置脱色摇床中缓慢摇动，室温1小时或4℃封闭过夜（5）。〈三〉靶蛋白与第一抗体结合 8 弃去封闭液，加入含有第一抗体的封闭液5～10mL，室温平缓摇动温育3小时。然后尽量回收
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