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4℃,避光,3个月
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100
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信帆生物
简单介绍:免疫金银染色、显影
注意事项:主要由阿拉伯胶、枸橼酸、对苯二酚、硝酸银。硝酸银溶液临用时加。
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文献和实验(一)硝酸银显影液①1%明胶60mi.②柠檬酸缓冲液10ml,pH3.4(柠檬酸2.55g,柠檬酸钠2.35g,加水至10m1)。③对苯二酚1~1.7g,加水至30ml.④硝酸银50~100mg,加水至2ml.用前①~③液混合过滤,最后加入④液。(二)乳酸银显影液①10%一20%阿拉伯树胶60ml.②柠檬酸缓冲液10ml(配法同上)。③对苯二酚0.85g,加水至15mi.④乳酸银110mg,加水至15ml.以上①~③液用前混合过滤,最后加入④液。(三)醋酸银显影液①100mg醋酸银溶解在50
不固定随意吧,假如你的蛋白分子量很小,也许5KD以下?那么固定一下也未尝不可。10、抗原抗体反应很灵敏,我的抗体在免疫荧光上面已经验证过的,所以敷抗体的过程没什么说的。不过抗体稀释比例的话,我是习惯提高浓度的,说明书1:1000,我就1:500。这个没有依据,纯癖好,也是师兄们教的。。。11、显影这一步我觉得也有可说的。我试过多次,发现我的这个蛋白第一遍滴加显影液后条带不会很清晰,然后你可以把条带拿出来就放一边让它反应一会,然后再放回机器里面,重新滴加显影液显影,效果就会好不少。还有显影时间,结合
-propylgallate)加入15ml塑料离心管内,先用250ul 100%乙醇溶解,然后加双蒸水至5ml。用前1小时内配制,4℃保存。 D液(银盐):称取11mg乳酸银加入用锡纸包裹的1.5ml Eppendorf管内,加双蒸水1.5ml溶解。临用前配制。 临用前在解冻的5mlB液中依次加入2ml A液、1.5ml C液和1.5ml D液,混合后即银加强液。冰中保存。注意避光。 漂洗缓冲液 :取1mol/L HEPES贮存液2.5ml、蔗糖3.42g,加双蒸水至50ml,4℃保存。
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