细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒北京供应商

特别提示：包括细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒
英文名称：Cell membrane / cytoplasm / nuclear membrane protein stepwise Extraction Kit
产品货号：HR8005
产品规格：50T|100T

细胞膜蛋白/胞浆蛋白/核膜蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中分步提取细胞膜蛋白/胞浆蛋白/细胞核膜蛋白/核内蛋白。提取过程简单方便，可在2小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；磷酸酶抑制剂2-8℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品特点：
1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管 ● 涡旋振荡器 ●冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：
1．旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2．实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3．蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
蛋白提取步骤：
1．提取液制备：每400μl冷的蛋白提取液A/D中加入分别加入2μl蛋白酶抑制剂混合物和2μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2．取5-10×106个细胞①，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，用细胞刮刀收集细胞。(组织样本50-100mg 剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨)，冰上静置5分钟，小心将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。在4℃，500g条件下离心2-3分钟，弃上清。)
3．用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．每5×106个细胞中加入400μl冷的蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下用试剂盒所配针筒反复吸吹细胞，使细胞完全破裂。
5.在4℃，1000g条件下离心5分钟。
6．快速将上清(I)吸入另一预冷的干净离心管，在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。
7．将混匀的提取液B 置2-8℃振荡1-2小时，至沉淀充分裂解，沉淀明显减少。
8．37℃水浴10分钟，37℃下②1000g-2000g 力离心5分钟，此时溶液分为两层(对着光线看)，上层为核内蛋白，下层是核膜蛋白约为20-40μl。小心移除上层，用1-2倍体积的提取液D溶解下层即为细胞核膜蛋白。
9.在步骤6中所得到的上清(I)中加入5μl提取液C，充分混匀。37℃水浴10分钟。
10．37℃下② 1000g离心3分钟，此时溶液分为两层(对着光线看)，上层是胞浆蛋白部分，下层是细胞膜蛋白部分约为40-50μl。
11．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
12．用80-200μl冰冷的提取液D溶解步骤10中的下层部分，即得细胞膜蛋白。
13．将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
注：
①细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
② 必需保证在37℃左右下离心，至少确保30℃以上。无可控温的离心机时，用常温的离心机在室温离心即可，适当缩短离心时间至2-3分钟。
③ 建议用BCA 法进行蛋白定量。
④蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

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