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239
- 英文名:
Bilirubin-Peroxidase Conjugate
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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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-20℃
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100μg/200μg
特别提示:包括HRP标记胆红素(Bilirubin-HRP)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:HRP标记胆红素(Bilirubin-HRP)
英文名称:Bilirubin-Peroxidase Conjugate
产品货号:GH0220
产品规格:100μg/200μg
本制品为胆红素与辣根过氧化物酶(HRP)经化学交联获得的标记物。本品溶于PBS(pH7.4)中,蛋白浓度≥1mg/ml,含BSA及甘油等酶稳定剂,可作为标记物用于抗体的制备,胆红素及其抗体的免疫检测。本产品经稀释后可用于ELISA检测,效价≥1:5000。
胆红素(Bilirubin)又称胆深素,胆深红,胆红质(Filirubin,Bilibubin,Biliyubin,hemetoidin,1,19-dioxo-Cholerythrin)是胆色素的一种,它是人胆汁中的主要色素,呈橙黄色。胆红素是血红蛋白的正常代谢产物,是由红细胞中的血色素经代谢产生的色素,红细胞有固定的寿命(正常红细胞的平均寿命约为120天),每日都会有所降解破坏。其中的血色素分解成为正铁血红素(haem)和血红素。正铁血红素在NADPH和H离子作用下生成胆绿素,三价Fe离子和CO,胆绿素再在NADPH和H离子作用下生成胆红素。胆红素属于二次甲基胆色素(Biladiene),为体内铁卟啉化合物的主要代谢产物,胆红素是一种胆汁色素,在人和肉食动物的胆汁中含量丰富。胆红素有毒,可对大脑和神经系统产生不可逆的损害,但也有抗氧化功能,可以抑制亚油酸和磷脂的氧化。胆红素入血后形成胆红素-清蛋白复合物。进入肝脏之前,胆红素-清蛋白复合物分离成胆红素和清蛋白,即间接胆红素。进入肝脏后,胆红素会与肝内Y蛋白和Z蛋白结合成胆红素-Y蛋白和胆红素-Z蛋白。胆红素-Y蛋白和胆红素-Z蛋白在UDP-葡萄糖醛酸转化酶的作用下生成葡萄糖醛酸胆红素。血液中的胆红素,在加入重氮试剂后出现红-紫色的Hijman van den Bergh反应。该反应存在两种类型:一种是不加醇就出现阳性反应的直接型,是胆红素的单或双葡糖醛酸酯,即结合胆红素;结合胆红素随着胆汁进入小肠,在小肠内脱掉葡萄糖醛酸再次生成胆红素,胆红素生成胆素原,胆素原进一步氧化成黄褐色的胆素,这就是粪便的主要颜色。在小肠里的胆素原可以经过肠肝循环再次到达肝,但这部分的胆素原大部分仍以原形排到肠道,这部分称为粪胆原。一小部分的胆素原进入体循环,并随尿排出。它是尿颜色的来源之一,是尿液中主要的色素,这部分称为尿胆原。另一种胆红素是加入醇才显色的间接型,是游离型。胆红素是临床上判定黄疸的重要依据,也是肝功能的重要指标。
保存条件:-20℃或以下温度保存。勿反复冻融或于4℃以上久置。
除了HRP标记胆红素(Bilirubin-HRP),,我公司还供应以下相关产品:
名称:鸡卵清蛋白偶联沙丁胺醇
货号:F040107
规格:1mg
名称:肌酸激酶B多肽(CK-B,80)
货号:GH0011
规格:0.5mg/1mg/2mg
肌酸激酶B多肽(Creatine kinase B chain Polypeptide,CK-B)为我公司人工合成并纯化的肌酸激酶B的多肽(80),本品为干粉或水溶液。
肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)(ATP:Creatine N-phosphotransferase EC 2.7.3.2)又名磷酸肌酸激酶(Creatine Phosphokinase,CPK),通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中,它能可逆性地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应,是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶。肌酸激酶是由两个亚基组成的二聚体蛋白,根据组织分布的部位和亚基组成的不同可分为肌肉型(M)、脑型(B)、杂化型(MB)和线粒体型(Mt)四种同功酶形式。肌肉型肌酸激酶分子是由两个相同的亚基(MM型)组成的同源二聚体,主要存在于各种肌肉细胞中,BB型同源二聚体主要存在于脑细胞中,MB型异源二聚体主要存在于心肌细胞中,MiMi型主要存在于心肌和骨骼肌线粒体中。不同的同工酶的增高意义并不完全一样。肌肉型(MM)的增高通常是肌病的表现,杂化型(MB)的增高与心肌损害有关,这对于诊断心肌梗塞有比较重要的意义。
根据目前已经测定的兔、人、鸡、鼠肌酸激酶的一级结构,M型亚基由387个氨基酸残基组成,分子量约为43KDa,分子内有8个巯基,但无二硫键。大熊猫肌肉型肌酸激酶也是二聚体酶,每个亚基由376个氨基酸残基组成,分子量为42KDa。肌酸激酶的同功酶在临床诊断中有十分重要的意义。在各种病变包括肌肉萎缩和心肌梗塞发生时,人的血清中肌酸激酶水平迅速提高,目前认为在心肌梗塞的诊断中测定肌酸激酶的活性比做心电图更为可靠。心肌梗死时,肌酸激酶在发病6小时内升高,24小时达高峰,3-4日内恢复正常。其中肌酸激酶的同工酶CK-MB诊断的特异性zuì高。肌酸激酶因其具有重要的生理功能和临床应用价值已引起人们广泛的重视和深入的研究。
保存条件:在-20℃或以下可保存1年或以上,使用过程中可短时间保存于4℃,请勿反复冻融或于0℃以上久置。
名称:Cy5.5标记叶酸聚赖氨酸(FA-PLL-Cy5.5)
货号:GH0108
规格:100μg/200μg/1mg
本制品是以进口叶酸(FA),聚赖氨酸(Poly-lysine,PLL)和花青染料5.5(Cyanine 5.5,Cy5.5)为原料,采用化学交联制备的叶酸聚赖氨酸偶联物的Cy5.5标记物。本品溶于PBS(pH7.4)中,浓度≥1mg/ml,可做为配基用于叶酸受体组织与细胞化学染色和流式细胞分析以及活体成像等研究。
叶酸(Folic Acid,FA)是一组化学结构相似,生化特性相近的化合物统称,是由喋啶、对氨基*甲*和1个或多个谷氨酸结合而成的维生素。叶酸参与体内“一碳基团”的转移,是一碳基团转移酶系统的辅酶,在嘌呤和嘧啶的合成中起重要作用。叶酸缺乏时,“一碳基团”的转移发生障碍,导致核苷酸特别是胸腺嘧啶脱氧核苷酸的合成减少,以致骨髓中幼红细胞DNA的合成受到影响,细胞分裂增殖的速度明显下降,而出现巨幼红细胞贫血。妇女孕前或妊娠早期叶酸缺乏,还会导致神经管畸形的发生;此外,叶酸与同型半胱氨酸代谢关系密切,叶酸的缺乏可导致同型半胱氨酸向蛋氨酸的生物转化出现障碍,进而出现同型半胱氨酸血症,从而增大心血管发病风险,故检测叶酸水平对预防心血管疾病和胎儿神经管畸形的发生具有重要的生物学意义。
叶酸受体是一种与糖基化磷脂酰肌醇(Glycosylphosphatidylinositol,GPI)连接的膜糖蛋白,对叶酸有高度亲合性。叶酸偶联其它小分子化合物如抗肿瘤药物后,仍能保持与叶酸受体的高亲合性。研究表明,叶酸受体在大部分恶性肿瘤细胞表面均有过度表达。目前已鉴定出叶酸受体有α-FR、β-FR和γFR三种亚型,其中 α-FR在卵巢癌、子宫癌、翠丸癌、肺癌等一些上皮组织的恶性肿瘤细胞中高表达;P-FR在头颈部鳞状细胞癌及一些非上皮来源的癌组织中高表达,γ-FR分布很少,主要在血液组织出现恶变时有过度表达。叶酸受体的表达水平也与肿瘤的发展阶段有关,早期肿瘤的叶酸受体表达较低,晚期及高度恶变的肿瘤受体表达增强,此外,部分转移瘤的表达水平显著高于原发瘤。因此,叶酸受体被认为是一种较好的肿瘤标记物,目前已被开发作为临床诊断肿瘤的标记物。叶酸受体一般在正常组织中的表达高度保守,只在脉络丛、胎盘、肺、肠以及肾等一些正常上皮组织中有不同的表达,且仅分布于上皮细胞极化表面,不易接近血中的叶酸偶联物。因此,叶酸-药物偶联物在杀伤高表达叶酸受体的肿瘤细胞的同时,对正常组织的毒性较低。基于叶酸受体在肿瘤细胞与正常细胞中的这种表达差异,可实现叶酸-药物偶联物的主动靶向输送。与其它大分子靶向分子如单克隆抗体相比,以叶酸作为靶向分子具有许多独特的优点,如相对分子质量小、无免疫原性、廉价易得、稳定性好、与药物分子或载体之间的化学键合简单易行,靶向应用范围广泛。叶酸受体介导的靶向技术可将各种治疗试剂如小分子化疗药物、基因药物、核磁共振造影剂、蛋白毒素、放疗药物、中子捕获剂等选择性输送至肿瘤组织。
保存条件:-20℃或以下温度保存。勿反复冻融或于4℃以上久置。
使用说明:
本品经稀释后可用于组织和细胞叶酸受体的组织和细胞化学荧光检测和流式细胞分析或体内显影,工作浓度1:30~300。
贴壁细胞
1.取对数生长期培养细胞数瓶,倾去培养液;
2.加入适量EDTA细胞消化液分散(尽量不要用含胰蛋白酶的消化液);
3.离心1000-2000rpm 离心10min,弃掉上清;
4.加入无血清培养液或Hanks液清洗2遍;
5.在细胞管中分别加入阴性对照、阳性对照,或不同稀释度的标记物100~500μL/管,充分振荡混匀,室温避光孵育30-60分钟;
6.加入无血清培养液,振荡混匀,以1000rpm离心10分钟,弃上清;
7.加入500-2000μL 无血清培养液振动混匀,200-300目尼龙筛网滤除细胞团或颗粒;
8.流式细胞仪检测。
悬浮生长细胞
1.取对数生长期培养细胞数瓶,吹打混悬收集细胞悬液;
2.离心1000-2000rpm 离心10min,弃掉上清;
3.加入无血清培养液或Hanks液清洗2遍;
4.在细胞管中分别加入阴性对照、阳性对照,或不同稀释度的标记物100~500μL/管,充分振荡混匀,室温避光孵育30-60分钟;
5.加入无血清培养液,振荡混匀,以1000rpm离心10分钟,弃上清;
6.加入500-2000μL 无血清培养液振动混匀,200-300目尼龙筛网滤除细胞团或颗粒;
7.流式细胞仪检测。
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文献和实验问:有没有做辣根过氧化物标记的朋友啊,能不能把你们的步骤发给我。本人开始做,发现很多人用的浓度都不一样。答:1.1 试剂准备1) 10mg/mL HRP2) 0.06mol/L NaIO43) 0.16mol/L乙二醇4) 碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸馏水中,调pH值到9.5)5) 2.5mg/mL NaBH46) 0.01mol/L磷酸盐缓冲液,pH7.41.2 操作步骤1. 10mg/mL取HRP VmL,溶液为棕黄色,加入
酶与抗体交联的方法有许多种 , 根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备 HRP 结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 1. 原理:戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶 - 戊二醛 - 免疫球蛋白结合物。 2. 标记步骤: (1) 称取 HRP25
一、戊二醛二步法1. 原理戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。2. 标记步骤(1)称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中,于室温静置过夜。(2)反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱,用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟,收集棕色流出液。如体积大于5ml,则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中,缓慢搅拌。(3)将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml,搅拌下逐滴加入酶溶液中。(4)用1M
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