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- 2025年09月27日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
近岸
- 库存：
大量
- 规格：
200U
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| T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK) （10U/μl） | 20μl |
| 10×T4 PNK Reaction Buffer | 1ml |
| 10mM ATP | 50μl |
· T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)说明
T4多聚核苷酸激酶能够催化磷酸在g-位和双链/单链DNA或RNA的5’-羟基末端以及3’-单磷酸核苷间进行转移和交换：5’-OH +NTP<=>5’-P+NDP。T4多聚核苷酸激酶还具有3’磷酸酶活性，将3’-磷酸基团从寡核苷酸的3’磷酸末端、脱氧3’-单磷酸核苷和脱氧3’-二磷酸核苷上水解掉。
· T4多聚核苷酸激酶用途
引物或PCR产物的5’末端磷酸化以便进行连接反应。（参见欣百诺实验方案）
合成DNA接头(Linker) 的5’末端磷酸化以便进行连接反应。
DNA及RNA 5’末端的标记，用作寡核苷酸探针。
· 质量保证
T4多聚核苷酸激酶经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
· T4多聚核苷酸激酶使用建议
1) 1×T4 PNK反应缓冲液中不含ATP，需在反应体系中加入终浓度为1mM的ATP，也可以使用T4 DNA连接酶的反应液代替。
2) 铵离子强烈抑制T4 PNK活性，故DNA应溶于不含铵盐的溶液中。
3) 请参考常用分子生物学实验手册。
· 其他说明
详细内容请参考说明书
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文献和实验用 T4 标记的 5’ 末端 1． 无菌的 1.5ml 为了离心管置冰浴上顺序混合下列组分： 50 pmol 合成的寡核苷酸 2.5 μ l 10 ×反应缓冲液 10 μ l γ -[32 P]ATP （ 33pmol ） 1.5 μ l T4 多核苷酸激酶（ 15U ） 灭菌双蒸水加至 25 μ l 2． 37 ℃温育 30min 。 3． 当反应物正温育时，以 2000 × g 离心 2min 制备
。在这些情况下，仅有约10％的放射性标记物被转移，但实际上每个寡核苷酸分子都被标记。 2） 在反应混合液中加入8单位（约1 μl）T4噬菌体多核苷酸激酶。 充分混匀，于37 ℃温育45分钟。人该反应液中另取0.5 μl 加至另一装有10 10mmol/LTris.Cl(pH8.0)的反应管中，搁置一旁留备步骤3）使用。于68 ℃将其余的反应液加热10分钟，以灭活T4噬菌体多核苷酸激酶。 3） 按下列方法（Stawinski等，1977;Narang等，1980
我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！
。 （7）吸取上清，为核蛋白提取物。 （8）马上进行EMSA实验。 探针制备： 用γ-32P-ATP及T4多核苷酸激酶对合成的转录因子结合和突变型寡核苷酸的两条互补链分别进行末端标记。20 µl反应总体积中，加寡核苷酸10 pmol，10×T4多聚核苷酸激酶缓冲液2µl，γ-32P-ATP 3 pmol，T4多核苷酸激酶10 u，37 ℃反应45 min，再置于68 ℃ 10 min灭活。在离心管中加入退火反应液60 µl，互补配对的两条链的标记产物各20 µl，于95 ℃变性5min，缓慢降温
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