小鼠DNA甲基化转移酶（DNMT）elisa试剂盒

注意事项： 1．酶标板袋拆封后，尽快将不用的板孔放回，并放入干燥剂，保持酶标板干燥。 2．用户在初次使用试剂盒时，应将试剂盒平衡至室温，各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。 3，TMB A液避光保存。 4，洗板过程非常重要，不充分的洗板易导致假阳性。 5．建议所有标准品、样本都做双份检测。 6．请保持试验过程的连续性，禁止酶标板干燥，因干燥会使酶标板上的生物成分迅速失活。 7．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。 8．禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。 试验所需自备物品: 1.酶标仪(450nm波长滤光片) 2.37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 3.自动洗板机 4.高精度移液器， EP管及一次性吸头： 0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 5.吸水纸 洗板方法： 手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBt或TBT洗涤缓冲液 至少 0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 样品收集: 1.血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA或肝素，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5.其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6.样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7.样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 结果判断: 1. 以标准品的浓度为横坐标， OD值为纵坐标， 绘制标准曲线。 如有设置复孔，则应取其平均值计算。 以标准品的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 10. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。