- ￥1990
- 泽叶生物
- 中国/德国
- ZY13-ZY15510
- 2025年07月07日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
‘-20℃保存
- 保质期：
有效期一年
- 库存：
30
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
50次
PCR使用注意事项
1. 试剂盒中的所有组份，在室温～37℃完全融化后，用移液枪吸打混匀或将Microtube上下颠倒混匀，尽量避免剧烈振荡。混合10×LA PCR Buffer, LA Taq时, 为防止起泡或酶失活，需注意仔细轻轻混合。融化后的各组份在使用前请置于冰中保存。
2. 配制反应液时，使用移液器轻轻吸打混合，不能剧烈振荡。
3. 扩增长片段DNA时的引物特异性要高。引物的推荐长度为25-30 mers。
4. 尽量使用高纯度的模板DNA。扩增长片段DNA时的模板使用量为通常PCR时的4～5倍。
步骤、过程：
构建一段寡核苷酸探针：5’端标记荧光染料报告基团，3’端标记淬灭染料基团。当探针保持完整时，淬灭基团的靠近会通过空间上的荧光共振能力转移（FRET）而显著降低由报告染料基团发射的荧光。
如果存在目标序列，探针便会在其中一个引物结合位点的下游发生退火，并随着引物的延伸通过Taq DNA聚合酶的5’核酸酶活性，完成切除。
探针的切除将会引起：
将报告染料基团和淬灭染料基团进行分离，增强了报告染料基团的信号。
将探针从目的链上去除，使引物继续沿模板链末端延伸。因此，探针的介入并不会抑制整个PCR过程。
内源性对照：
数字 PCR 不依赖内源性对照品进行参考测量。对于内源性对照进行扩增可用于对加入至反应的样品 RNA 或 DNA 的量进行标准化。对于基因表达定量，研究者采用过 ß-肌动蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (GAPDH)、核糖体 RNA (rRNA) 或其他 RNA 作为内源性对照。
标准品：
因为数字 PCR 通过阴性与总平行样的比例确定分子绝对计数，所有无需标准品。 由于样品量会除以校准品的量，所以标准曲线中的单位便被去除了。因此，对于标准品来说，只需知道其相对稀释比。对于相对定量，任何含有合适目标分子的 RNA 或 DNA 储存液都可用于制备标准品。
每经过一个循环，就会有更多的报告基因染料分子从各自的探针上切断，荧光强度会随着合成的扩增片段数量的增加而增加。
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文献和实验Production of Infectious Poliovirus from Synthetic Viral Genomes
-free extract, where it is translated and replicated, resulting in the de novo synthesis of poliovirus (PV). Finally, in vivo and in vitro experiments are carried out to confirm that infectious material isolated from the cell-free extract
开来，并且每检测到一种条码的次数能反映这一基因表达的水平。 研究人员对509个人类基因进行了分析――其中347个基因在之前有关脊髓灰质炎病毒（poliovirus，注）感染细胞的研究中曾进行了分析，另外162个也用之前设计的探针进行了研究，并且研究人员也在实验中加入了另外15个对照基因。 通过在溶液中将524种基因探针的总RNA混和，研究人员将目标基因与探针杂交，然后利用亲和纯化去除了未杂交的探针，从而确保mRNA检测不受到干扰，进而检测每一种mRNA转录本被检测到的次数。
肠道病毒和轮状病毒 肠道病毒（Enterovirus）是小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)的一个属。它们在人类消化道细胞繁殖，然后通过血液侵犯其他器官，引起各种临床综合病症。肠道病毒包括： 1.脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)1～3型。 2.柯萨奇病毒 (Coxsackie virus)A、B两组。A组包括1～24型（A23与埃可病毒9型相同，故实际是23个型）；B组包括1～6型。 3.埃可病毒
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