- ￥2490
- 康朗生物
- 中国/德国
- KL16-46400
- 2025年07月08日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
‘-20℃保存
- 保质期：
有效期一年
- 库存：
30
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 规格：
50次
PCR使用方法：
2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作：
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料
管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。
6. 95℃保温 10 分钟。
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。
二、设置 PCR 反应（40 uL 体系）
8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：
| 成份 | 样品（用量1） | 样品（用量2） | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 即用型 PCR Mix 3.0 | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
| PCR 引物混合液 | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
| 制备的样品 | 18 uL | 2 uL | 无 | 无 |
| 样品制备阳性对照 | 不加 | 不加 | 2 uL | 不加 |
| 样品制备阴性对照 | 不加 | 不加 | 不加 | 2 uL |
| 超纯水 | 不加 | 16 uL | 16 uL | 16 uL |
9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 10分钟 |
| PCR 反应 （35 个循环） |
94℃ | 45s |
| 56℃ | 45s | |
| 72℃ | 45s | |
| 延伸 | 72℃ | 5分 |
10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验原理 带有T7启动子的引物与靶标RNA结合，开始逆转录合成cDNA；在M-MLV RT酶的RNase H活性作用下靶标RNA链降解，形成单链cDNA；之后反向引物与cDNA结合，在M-MLV RT酶的聚合酶活性作用下产生靶标核酸（RNA）的一个双链DNA拷贝，且该双链带有T7启动子。在T7 RNA聚合酶的作用下，一条DNA双链上产生多个（100～1000个）RNA拷贝；每一个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增循环；同时，带有荧光标记的探针和这些RNA拷贝特异结合，产生荧光。该荧光信号可由荧
RNA 并将mRNA逆转录成 cDNA。随后，通过由PCR扩增的cDNA数量，确定 mRNA 的初始水平。这一过程也被称为逆转录 PCR， RT-PCR （图 1）。 图 1. RT-PCR.RNA 被逆转录成 cDNA，随后通过 PCR 扩增 cDNA 终点 PCR 可通过凝胶里的扩增产物条带强度对 RNA 的表达进行定量（一种半定量方法）。例如，对起始 cDNA 进行连续稀释并扩增。通过凝胶电泳使不同起始量的终点 PCR 得率可视化（图 2），然后对条带强度进行定量，并以管家基因为参照
-A尾巴的RNA分子加上一串A尾巴，然后用带有一段通用序列（universal tag）的Oligo-dT及RT酶来合成cDNA。这样设计的一个好处就是一次RT反应合成了所有miRNA分子以及其他小RNA、mRNA对应的cDNA，接下来想用来检测什么都可以，细细算来省了不少特异引物和多次RT反应的钱呢！整个RT反应操作也是非常简单，加入预先混好的酶，37℃孵育60min，95℃孵育5min即完成cDNA合成。 最后一步就是取出一点cDNA为扩增模板，加入正反引物和real-time PCR 试剂盒
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
