- ￥1490
- 康朗生物
- 中国/德国
- KL13-10300
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
‘-20℃保存
- 保质期：
有效期一年
- 库存：
30
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 规格：
50次
PCR使用方法：
2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作：
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料
管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。
6. 95℃保温 10 分钟。
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。
二、设置 PCR 反应（40 uL 体系）
8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：
| 成份 | 样品（用量1） | 样品（用量2） | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 即用型 PCR Mix 3.0 | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
| PCR 引物混合液 | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
| 制备的样品 | 18 uL | 2 uL | 无 | 无 |
| 样品制备阳性对照 | 不加 | 不加 | 2 uL | 不加 |
| 样品制备阴性对照 | 不加 | 不加 | 不加 | 2 uL |
| 超纯水 | 不加 | 16 uL | 16 uL | 16 uL |
9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 10分钟 |
| PCR 反应 （35 个循环） |
94℃ | 45s |
| 56℃ | 45s | |
| 72℃ | 45s | |
| 延伸 | 72℃ | 5分 |
10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增
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文献和实验脂症，甚至部分肿瘤，均是当前研究的重点，近期内可有突破。 (2) 致病病原体的检测。这些外源入侵的基因，一旦阐明其部分核酸序列，就可以设计引物和探针，用PCR、RT-PCR或杂交方法来检测，其范围包括细菌、病毒、原虫及寄生虫、霉菌、立克次体、衣原体和支原体等一切微生物。基因诊断的特点是可以其基因中的保守区做通用检测，也可以选定差异较大的基因部位做分型检测；即可以做单一病原体的专用检测，也可以将有关的病毒、细胞中不同的品种做一次多元检测，而且检测的灵敏度和特异性都远高于当前的免疫学方法，所需时间已达到临床
事项 （ 1 ） 防止溶血：造成溶血的因素有注射器和容器不干燥、不清洁；淤血时间过长；穿刺不顺利，组织损伤过多；抽血速度太快；血液注入容器时未取下针头或注入速度过快产生大量泡沫；震荡过于剧烈等。若用普通注射器采血后，未取针头直接将血注入真空管内，也易造成溶血。体内溶血属合格标本，但应在报告单上注明。 （ 2 ） 避免充血和血液浓缩：采血时应动作迅速，尽可能缩短止血带使用时间。用止血带压迫时间最好不超过半分钟，否则将使生化结果升高或下降。 （ 3 ） 若病人正在进行静脉输液，不宜在输液同侧手臂
是老年性疾病，如糖尿病、高血脂症、甚至肿瘤中的一部分，均是当前研究的重点，近期内可望有突破。 2．致病病原体的检测 这些外源入侵的基因，一旦阐明其部分核酸序列，就可以设计引物或探针，用PCR、PT-PCR或杂交方法来检测，其范围包括细菌、病毒、原虫及寄生虫、霉菌、立克次体、衣原体和支原体等一切微生物，PCR诊断的特点是可以选择其基因中的保守区作通用检测，也可以选定差异较大的基因部位作分型检测。既可以做一病原体的专用检测，也可以将有关病毒、细菌中不同的品种作一次多元检测。而且检测的灵敏度和特异
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