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- 文献和实验
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- 保存条件:
‘-20℃保存
- 保质期:
有效期一年
- 库存:
30
- 供应商:
上海康朗生物科技有限公司
- 规格:
50次
PCR使用方法:
2. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作:
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足够 10 个样品)为例:在一干净塑料
管中加入 10uL 溶液 A 成分一,20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水,充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置,但最好在一周内用完,不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字,配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
4. 在标记好的 N+2 个离心管中,加入 1-5mg 固体样品(半粒芝麻大小,如奶酪)或5uL 液体样品(如牛奶)待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照,在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液,确保固体样品被溶液淹埋,如果是液体样品则震荡混匀。
6. 95℃保温 10 分钟。
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。
二、设置 PCR 反应(40 uL 体系)
8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分,下面以样品数为 1 举例(注意:如果第一次使用DNA 释放剂,最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应,两个反应的模板使用量差 10 倍,由此确定最佳用量,以后就用效果好的那个模板用量):
| 成份 | 样品(用量1) | 样品(用量2) | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 即用型 PCR Mix 3.0 | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
| PCR 引物混合液 | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
| 制备的样品 | 18 uL | 2 uL | 无 | 无 |
| 样品制备阳性对照 | 不加 | 不加 | 2 uL | 不加 |
| 样品制备阴性对照 | 不加 | 不加 | 不加 | 2 uL |
| 超纯水 | 不加 | 16 uL | 16 uL | 16 uL |
9. 轻柔混匀后上机,按下面参数进行 PCR。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 10分钟 |
| PCR 反应 (35 个循环) |
94℃ | 45s |
| 56℃ | 45s | |
| 72℃ | 45s | |
| 延伸 | 72℃ | 5分 |
10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩增
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文献和实验可被细菌分解生成丙酮酸,丙酮酸脱去羧基为乙醛,乙醛与无色的复红生成醌式化合物,呈深紫红色。 (2)方法:取被检菌接种于甘油复红肉汤培养基中,于35℃孵育,观察2~8d。应同时做阴性对照。 (3)结果:紫红色为阳性,与对照管颜色相同为阴性。 (4)应用:主要用于沙门菌属内各菌种间的鉴别。伤寒沙门菌、甲(丙)型副伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、孔道夫沙门菌和仙台沙门菌本试验为阴性,乙型副伤寒沙门菌结果不定,其它不常见沙门菌多数为阳性。 9.葡萄糖酸氧化试验 (1)原理:某些细菌可氧化葡萄
棒状杆菌生物型的分型,重型淀粉水解试验阳性,轻、中型阴性;芽胞杆菌属菌种和厌氧菌某些种的鉴定。8.甘油复红试验(1)原理:甘油可被细菌分解生成丙酮酸,丙酮酸脱去羧基为乙醛,乙醛与无色的复红生成醌式化合物,呈深紫红色。(2)方法:取被检菌接种于甘油复红肉汤培养基中,于35℃孵育,观察2~8d。应同时做阴性对照。(3)结果:紫红色为阳性,与对照管颜色相同为阴性。(4)应用:主要用于沙门菌属内各菌种间的鉴别。伤寒沙门菌、甲(丙)型副伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、孔道夫沙门菌和仙台沙门菌本试验为阴性,乙型副伤寒沙门菌
和蛋白质外,对一些有机物和无机物也可分解利用。各种细菌产生的酶不同,其代谢的基质不同,代谢的产物也不一样,故可用于鉴别细菌医学|教育网搜集整理。 (1)对其他有机物的分解:如变形杆菌具有尿素酶,可以水解尿素,产生氨。乙型副伤寒沙门菌和变形杆菌都具有脱硫氢基作用,使含硫氨基酸(胱氨酸)分解成氨和H2S. (2)对其他无机物的分解:产气肠杆菌分解柠檬酸盐生成碳酸盐,并分解培养基中的铵盐生成氨。细菌还原硝酸盐为亚硝酸盐,氨和氮气的作用,称为硝酸盐还原作用。 4.细菌合成
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