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乙型副伤寒沙门菌PCR试剂盒

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  • ¥1490
  • 康朗生物
  • 中国/德国
  • KL13-32910
  • 2025年07月11日
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      ‘-20℃保存

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      有效期一年

    • 库存

      30

    • 供应商

      上海康朗生物科技有限公司

    • 规格

      50次

    产品细节图片1
    PCR使用方法
    一、样品 DNA 的制备
    1. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
    2. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作:
    3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足够 10 个样品)为例:在一干净塑料
    管中加入 10uL 溶液 A 成分一,20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水,充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置,但最好在一周内用完,不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字,配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
    4. 在标记好的 N+2 个离心管中,加入 1-5mg 固体样品(半粒芝麻大小,如奶酪)或5uL 液体样品(如牛奶)待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照,在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
    5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液,确保固体样品被溶液淹埋,如果是液体样品则震荡混匀。
    6. 95℃保温 10 分钟。
    7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。

    二、设置 PCR 反应(40 uL 体系)  
    8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分,下面以样品数为 1 举例(注意:如果第一次使用DNA 释放剂,最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应,两个反应的模板使用量差 10 倍,由此确定最佳用量,以后就用效果好的那个模板用量):
    成份 样品(用量1 样品(用量2 阳性对照 阴性对照
    即用型 PCR Mix 3.0 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL
     PCR 引物混合液 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
    制备的样品 18 uL 2 uL
    样品制备阳性对照 不加 不加 2 uL 不加
    样品制备阴性对照 不加 不加 不加 2 uL
    超纯水 不加 16 uL 16 uL 16 uL

    9. 轻柔混匀后上机,按下面参数进行 PCR。
    过程 温度 时间
    预变性 94 10分钟
    PCR 反应
    35 循环)
    94 45s
    56 45s
    72 45s
    延伸 72 5

    10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩增

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