- ￥1490
- 康朗生物
- 中国/德国
- KL13-KL16420
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
‘-20℃保存
- 保质期：
有效期一年
- 库存：
30
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 规格：
50次
PCR使用方法：
2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作：
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料
管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。
6. 95℃保温 10 分钟。
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。
二、设置 PCR 反应（40 uL 体系）
8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：
| 成份 | 样品（用量1） | 样品（用量2） | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 即用型 PCR Mix 3.0 | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
| PCR 引物混合液 | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
| 制备的样品 | 18 uL | 2 uL | 无 | 无 |
| 样品制备阳性对照 | 不加 | 不加 | 2 uL | 不加 |
| 样品制备阴性对照 | 不加 | 不加 | 不加 | 2 uL |
| 超纯水 | 不加 | 16 uL | 16 uL | 16 uL |
9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 10分钟 |
| PCR 反应 （35 个循环） |
94℃ | 45s |
| 56℃ | 45s | |
| 72℃ | 45s | |
| 延伸 | 72℃ | 5分 |
10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增
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文献和实验生物学性状 （1）肾形的革兰阴性双球菌，凹面相对。在患者脑脊液中，多位于中性白细胞内，形态典型。新分离菌株大多有荚膜和菌毛。 （2）营养要求较高，专性需氧，在5%CO2条件下生长良好。在巧克力色培养基上形成似露滴状菌落。细菌培养超过48h易裂解自溶。 （3）抗原结构与分类1）荚膜多糖抗原 具有群特异性，将本菌分为A，B，C，D，X，Y，Z，29E，W135和L10个血清群。我国建立了H，I，K3个三个新血清群，总计13个血清群。国内一直以A群为主。C群致病力最强
脑膜炎奈瑟菌的临床意义是检验主管技师考试中所包含的内容。医学教育网收集整理了部分相关信息供学员参考。 致病物质：菌毛，荚膜，内毒素。 所致疾病：脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌。主要表现发热，皮肤瘀斑，脑膜刺激症状。存在于携带者或病人的鼻咽部，借飞沫经空气传播，冬末春初为流行高峰。
脑膜炎奈瑟菌的生物学特性是检验主管技师考试中所包含的内容。医学教育网收集整理了部分相关信息供学员参考。 （1）形态与染色：为革兰阴性双球菌，菌体呈肾形，成对排列，坦面相对，菌体直径0.6～1.5μm，在患者的脑脊液中位于中性粒细胞内。 （2）培养特性：营养要求高，属苛养菌，必须在含有血清或含有多种氨基酸，无机盐等物质的培养基上生长良好。 （3）生化反应：绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气（因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖，借此与之鉴别），触酶
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