传染性脾肾坏死病病毒PCR试剂盒

传染性脾肾坏死病病毒PCR试剂盒

Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus(ISKNV ）

产品及特点

传染性脾肾坏死病病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus， ISKNV)引起传染性脾肾坏死病，又叫鳜暴发性出血病，它是一种严重危害淡水 养殖鳜的传染性、病毒性疾病，可引起暴发性死亡，我国将其列为二类疫病。 传染性脾肾坏死病毒属虹彩病毒科，病毒有囊膜，二十面体，直径 125～ 145nm，病毒基因组为双链 DNA。传染性脾肾坏死病主要流行于我国南方淡 水养殖的鳜中，具有很高的死亡率，对鳜养殖业造成很大的威胁。鳜是 ISKNV 的自然宿主和敏感宿主，但该病毒还可以感染 50 多种海、淡水养殖鱼类，因 此传染性脾肾坏死病病毒的快速诊断具有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：  

 

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增传染性脾肾坏死病病毒

3. ，与其他病毒没有交叉反应。

4. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

5. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

6. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。  

传染性脾肾坏死病病毒PCR试剂盒规格及成分

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.	1 mL（亮黄盖）
试剂二	超纯水	1 mL（蓝色）
试剂三	传染性脾肾坏死病病毒PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	传染性脾肾坏死病病毒 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖））
试剂五	天净沙核酸释放剂试用装	20 次（1mL，绿盖）
试剂六	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。 

自备试剂 样品 DNA。
 

 

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此 作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。 

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 

成分	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
传染性脾肾坏死病病毒 PCR 引物 混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL	-
PCR 阳性对照（传染性脾肾坏死病病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液）	-		18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应 （35个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

 

 

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！