传染性胰脏坏死病病毒RT-PCR试剂盒

传染性胰脏坏死病病毒RT-PCR试剂盒

Infectious Pancreatic Necrosis Virus(IPNV)

产品及特点

传染性脾肾坏死病病毒(Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus， ISKNV）会引起传染性脾肾坏死病，是以脾、肾坏死为主要病理特征的一种病毒 性疾病。病鱼嘴张大，呼吸加快，食欲下降，鱼体变黑，有时有抽筋样颤动；头 部充血，口四周和眼出血；脾脏肿大、糜烂和充血，呈紫黑色；肾脏肿大、充血 和溃烂；肝脏肿大，有缺血状、土黄色或有淤血点等症状；常见有腹水，肠内有 时充满黄色粘稠物，胆囊肿大；鳃贫血，发白，伴有寄生虫或细菌感染出现出血、 腐烂等现象。传染性脾肾坏死病主要流行于我国南方淡水养殖的鳜中，具有很高 的死亡率，对鳜养殖业造成很大的威胁，严重危害我国鳜养殖业发展，因此传染 性脾肾坏死病病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公 司开发了简单快捷的传染性脾肾坏死病病毒染料法荧光定量 PCR 检测试剂盒， 它具有下列特点： 

 

 

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据传染性脾肾坏死病病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

传染性胰脏坏死病病毒RT-PCR试剂盒规格及成分

编号	成  份	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黄盖）
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖）
试剂三	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂四	传染性脾肾坏死病病毒 RT-PCR 引物 混合液	100 μL（白盖）
试剂五	传染性脾肾坏死病病毒 RT-PCR 阳性 对照（1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂六	天净沙核酸释放剂（试用装）	20 次（1mL，绿盖）
试剂七	使用手册	1 份）

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。 

自备试剂 样品 RNA
 

 

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 流行性出血热病毒 PCR 阳性对照的 100 倍稀释作为制备的阳性对照；用水作为制备的阴性对照。 制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

成分	样品	阳性对照	阴性对照
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
传染性脾肾坏死病病毒 RT-PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2 个制备的 RNA 样品	各12.5 μL
超纯水		12.5 μL
传染性脾肾坏死病病毒 RT-PCR 阳性对照 的 100 倍稀释液	L		12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30 min
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	98℃	10 sec
	65℃	35 sec
延伸	72℃	1min

 

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物， 则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照有 122bp 预期的扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果， 如果有扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！