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- 文献和实验
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- 保存条件:
‘-20℃保存
- 保质期:
有效期一年
- 库存:
30
- 供应商:
上海沪震实业有限公司
- 规格:
50次
PCR试剂盒具有下列特点:
1. 一管式操作,用户只需要提供样品即可。
2. 根据PCR基因保守区域设计引物,能专一性地检测出猪的成分,但不能检测其他非猪类动物成分(如鸡、牛、羊等)。
3. 快速,整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为 2.0 小时。
4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪,无需配置贵重仪器设备。
5. 对混合样品中猪成分的检测下限为 0.1%,对样品中猪成分的核酸检测下限为 1.0ng/µL。
6. 本只能用于科研,足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。
设计PCR用引物时的注意事项?
可以从以下几个方面考虑。
1. 引物长度通常为20~25 mer。但进行LA PCR时,引物长度应增长为30~35 mer。
2. 二条引物之间不能进行Annealing,对3′端的3个碱基需特别注意。
3. GC含量在50~60%,避开局部富含GC或AT,为了使引物和模板稳定结合,3′端应避开AT rich结构。
4. 避开引物自身形成二级结构。
5. 选择Tm温度相互接近的二条引物。
PCR用引物的Tm值的计算方法?
引物为20 mer以下时:
Tm = 2℃×(A+T) + 4℃×(G+C)
引物为20 mer以上时:
Tm = 81.5 + 0.41×(GC%) - 600/L
其中L为引物的长度。
在PCR反应过程中选择Annealing温度时,一般为 (Tm - 5)℃。
PCR用引物中含有Inosine (次黄苷) 碱基,其Tm值怎样计算?
可以不考虑Inosine碱基,使用A、G、C、T计算Tm值就可以。
PCR用引物的使用量?
合适的终浓度可在0.1 μM~1.0 μM之间选择。引物的浓度太低时,有时扩增产物太少;引物浓度太高时,比较容易出现非特异性扩增反应。通常模板DNA的量较多或High complexity DNA (例如Human genome DNA) 作模板时,引物浓度应低一些;当模板DNA的量较少或Low complexity DNA (例如Plasmid等) 作模板时,引物浓度应高一些。
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