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文献和实验柜中使用。7. 如果用于 RT-PCR 实验,即使有少量的基因组 DNA 也会影响实验结果,因此,实验前应使用 Recombinant DNase I 进行处理。8. 选择一个不会被空调风或者其他外界气流影响到的位置来操作 RNA 提取步骤。DEPC 水用于配制电泳缓冲液和溶解 RNA(晚上操作比较好)。1. 准备:2L 平底试剂瓶,2L 量筒, 磁力搅拌子(合适的,不要太大也不要太小,太大转不动,太小旋转的力度小,行成的漩涡小),DEPC,去离子水,黑色塑料袋 / 锡箔纸。2. 加
力量。在体内终止试验中,通过其与框架移位的竞争测定其终止效率。转录效率依据终止密码子和第四个核苷酸而有显著的差异,这种差异从80%(UAAU)到7%(UGAC)不等。这些研究表明,紧接终止密码子后的核苷酸特性强烈地影响E.coli中的翻译终止效率[127]。UAAU是E.coli中最有效的转录终止序列。此外,终止密码子5’末端的邻近序列也影响终止的效率。因此,新生肽中倒数第二位(-2位)C-末端氨基酸残基的电荷和疏水性能引起多达30倍不同的UGA终止效率,而在UAG位的终止对于-2位氨基酸残基
上还连接有MGB (Minor Groove Binder)修饰基团,可以将探针的Tm值提高10°C左右。因此为了获得同样的Tm值,MGB探针可以比普通TaqMan探针设计得更短,既降低了合成成本,也使得探针设计的成功率大为提高——因为在模板的DNA碱基组成不理想的情况下,短的探针比长的更容易设计。实验证明,TaqMan MGB探针对于富含A/T的模板可以区分得更为理想。 Taqman探针法已经得到广泛使用,不过有人认为这种技术利用了Taq酶5`—3`外切酶活性,一般试剂厂家只给Taq
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