WB化学发光法检测试剂盒(人IgG)

特别提示：包括WB化学发光法检测试剂盒(人IgG)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：WB化学发光法检测试剂盒(人IgG)
英文名称：ECL Western Blotting Detection Kit(Human IgG)
产品货号：QN2678
产品规格：1kit

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置）。

产品内容：
封闭试剂：30g(可配制400ml)。
10倍浓缩抗体稀释液，50ml。
HRP标记二抗，0.3ml，效价1:500～1000。
ECL显色液，25ml A液 + 25ml B液。
保存条件：-20℃避光密闭保存，有效期一年。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和ECL显色液存放于 2-8℃以方便使用。

操作步骤(仅供参考)：
常规电泳转膜后：
1．清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2．按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T缓冲液（pH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。
3．将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4．用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
  注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5．用TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。
6．用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入15μl HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天
再使用一次。
7．用TBS-T缓冲液（pH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次10min。
8．根据用量，取ECL发光液A、B等量混匀，加在膜正面，暗室显色1～5分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30秒到1分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中1分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间（从5秒到30分钟）以期达到理想结果。

注意事项：
1．请根据一抗来源选择试剂盒。
2．可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长zuì终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3．TBS-T（0.01M，PH7.6）配制方法：称取NaCl 8.5g，Tris 1.21g，用800ml双蒸水溶解，用盐酸调pH到7.6，再加入0.5ml Tween-20，用双蒸水 加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）

除了WB化学发光法检测试剂盒(人IgG),，我公司还供应以下相关产品：



名称：Western一抗二抗清除剂(中性)
货号：YT073
规格：250ml
本品用于Western中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测tubulin、actin等表达量相对稳定的蛋白作为参照，或检测其它蛋白进行比较。通过使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。

使用Western一抗二抗去除液多次重复使用同一张膜，会导致蛋白信号的减弱。但是，本Western一抗二抗去除液，经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用膜3-5次。使用本试剂只需大约20-30分钟即可实现蛋白膜的重复使用，然后可以进行封闭等后续的Western操作。

百奥莱博的不同的Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合，同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。

抗体清除剂选型表：
 

产品编号	YT071	YT072	YT073	YT074
产品名称	Western一抗二抗清除剂(强碱性)	Western一抗二抗清除剂(弱碱性)	Western一抗二抗清除剂(中性)	Western一抗二抗清除剂(酸性)
产品包装	250ml	250ml	250ml	250ml
pH	强碱性	弱碱性	中性	酸性
对于膜上蛋白的保留效果	好	好	好	好
对于一抗二抗的去除效果	好	好	好	好
去除一抗二抗所需时间	15-20分钟	20-30分钟	20-30分钟	40-80分钟
适用膜的类型	PVDF和NC	PVDF和NC	仅PVDF	PVDF和NC
腐蚀性	强	弱	无	弱

用于普通的Western检测时蛋白膜上一抗二抗的去除可以任选一种去除液。如果是NC膜，即硝酸纤维素膜时，不宜选用YT071N。从时间角度考虑，强碱性、弱碱性和中性的去除液所需的时间都比较短，可以优先考虑。从价格因素考虑，强碱性的去除液性价比zuì高。从安全性考虑，中性的去除液由于没有腐蚀性而表现出更高的安全性。弱碱性和弱酸性一抗二抗去除液的安全性次之。但只要正确操作，并进行适当防护，使用强碱性的一抗二抗去除液也是完全可行的。
　　对于特定的抗原和抗体，很难说哪一种Western一抗二抗去除液的效果zuì好。在遇到一抗二抗去除效果欠佳时，可以考虑适当延长一抗二抗去除液的孵育时间，同时确保孵育时的温度不低于20℃。温度过低时一抗二抗的去除效果会下降。同时也可以考虑尝试其它的一抗二抗去除液，以摸索出zuì佳的适合您实验条件的Western一抗二抗去除液。

注意事项：
1. 使用辣根过氧化物酶(HRP)，任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶，如果使用碱性磷酸酯酶，任何一次封闭都应当使用酪蛋白(casein)。
2. 本Western一抗二抗去除液仅适用于PVDF膜。用于硝酸纤维素膜时会导致转移到膜上的蛋白有非常显著的损失。
3. 使用化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western检测，例如DAB，NBT/BCIP，不适用于本试剂。

储存条件：-20℃，有效期一年。