总糖含量检测试剂盒 微量法

总糖含量检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC2715
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	液体100 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	液体100 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂三	液体5 mL×1瓶	2-8℃保存
标准品	粉剂×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 标准品：10 mg无水葡萄糖。临用前加1 mL蒸馏水溶解为10 mg/mL的葡萄糖标准品备用，2-8℃保存两周。

产品说明：
糖类物质是构成植物体的重要成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖，麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。
总糖酸水解为还原糖，还原糖在碱性条件下与DNS试剂共热后被还原成氨基化合物，在碱性溶液中呈红棕色，还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系，以此测定样本中的总糖含量。
技术指标：
最低检出限：0.0667 mg/mL
线性范围：0.09-1.8 mg/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织样本的处理：称取约0.1g样本于10mL EP管中，加入1mL 试剂一，1.5mL蒸馏水，研磨匀浆，沸水浴30min，加入1mL试剂二，涡旋混匀，用蒸馏水定容至10mL，8000g，25℃离心10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）
2、血清（浆）、液体样本的处理：取0.1mL血清（浆）于1mLEP管中，加入0.1mL 试剂一，0.15mL蒸馏水，匀浆，沸水浴30min，加入0.1mL试剂二，涡旋混匀，用蒸馏水定容至1mL，8000g，25℃离心10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）

二、测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，分光光度计用蒸馏水调零。

1. 标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至1.6、1.0、0.8、0.4、0.2、0.1mg/mL，标准液稀释可参考下表：

序号	稀释前浓度（mg/mL）	标准液体积（µL）	蒸馏水体积（µL）	稀释后浓度（mg/mL）
1	10	32	168	1.6
2	10	100	900	1
3	1	160	40	0.8
4	0.8	100	100	0.4
5	0.4	100	100	0.2
6	0.2	100	100	0.1

备注：实验中每个标准管需30µL标准溶液。
3、加样表：

试剂（μL）	空白管	测定管	标准管
蒸馏水	30	-	-
样本	-	30	-
标准品	-	-	30
试剂三	30	30	30
涡旋混匀，沸水浴10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温
蒸馏水	180	180	180

涡旋混匀，取出200μL在540nm下测定吸光值，分别记为A空白管、A测定管、A标准管。计算ΔA测定=A测定管-A空白管、ΔA标准=A标准管-A空白管。标准曲线和空白管只需测1-2次。

注意事项：
1、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。
2、此试剂盒对于纤维素的分解程度无法达到100%。
实验实例：

1. 取0.1g兔子肝脏进行样本处理，取上清，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.599-0.05=0.549，标准曲线y=0.8881x-0.0561，则x=0.6813，按样本质量计算含量得：

总糖含量（mg/g 质量）=10×x÷W=68.13 mg/g 质量。

1. 取0.1g迎春进行样本处理，取上清，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.594-0.05=0.544，标准曲线y=0.8881x-0.0561，则x=0.6575，按样本质量计算含量得：

总糖含量（mg/g 质量）=10×x÷W=65.75 mg/g 质量。

1. 取小鼠血清进行处理，取上清，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.294-0.05=0.244，标准曲线y=0.8881x-0.0561，则x=0.338，按血清体积计算含量得：

总糖含量（mg/mL）=10×x=3.38 mg/mL。
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