土壤淀粉酶活性检测试剂盒 可见分光光度法

土壤淀粉酶（S-AL）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1920
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	液体10 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×1瓶	2-8℃保存
试剂三	液体65 mL×1瓶	2-8℃保存
标准品	粉剂×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前加入5 mL蒸馏水，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌或震荡至粉剂溶解，用不完的试剂2-8℃保存4周。
2. 标准品：10 mg麦芽糖。临用前加入1.38 mL蒸馏水配制成20 μmol/mL的储备液，2-8℃保存两周。

产品说明：
淀粉酶（EC3.2.1.1）是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀粉酶主要来自于微生物，是一种重要的酶制剂，广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业
淀粉酶水解淀粉产生还原糖，可与3,5-二硝基水杨酸反应生成红棕色物质，在540nm处有特征吸收峰，颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
天平、恒温培养箱/水浴锅、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、30~50目筛、研钵、甲苯（不允许快递）。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：

1. 当ΔA大于1时，建议将上清液稀释后再进行测定，注意在计算公式中乘以稀释倍数。
2. 若ΔA测定较小，增加反应的上清液体积或适当增加酶促反应时间，计算酶活时对公式进行修改。
3. 建议每次实验煮沸后的冷却时间保持一致，吸光值请于30min内测定完成。

实验实例：

1. 取0.1g三叶草土于1.5mLEP管中，依次加入20μL甲苯、200μL试剂一、200μL试剂二为测定管；取0.1g三叶草土于1.5mLEP管中，依次加入20μL甲苯、200μL试剂一、200μL蒸馏水为对照管，均放于37℃培养24h，后离心取上清再液稀释5倍，之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.624-0.109=0.515，标准曲线：y=1.289x-0.2826，x=0.6188，按土样重量计算酶活：

S-AL（U/g 土样）=0.42×x÷W×5（稀释倍数）=0.42×0.6188÷0.1×5（稀释倍数）=12.995 U/g 土样。
参考文献：
[1] Kathiresan K, Manivannan S. α-Amylase production by Penicillium fellutanum isolated from mangrove rhizosphere soil[J]. African journal of Biotechnology, 2006, 5(10).
[2] Ebregt A, Boldewijn J. Influence of heavy metals in spruce forest soil on amylase activity, CO 2 evolution from starch and soil respiration[J]. Plant and Soil, 1977, 47(1): 137-148.
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