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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
Acyltransferase(AAT) Activity Assay Kit
- 库存:
99
- 供应商:
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号:
BC2355-100T/96S
- 规格:
100管/96样
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC2355
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 液体15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×2支 | -20℃保存 |
| 试剂三 | 液体3 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂四 | 液体1.5 mL×1支 | 2-8℃保存 |
- 提取液:内含不溶物,使用前摇匀。
- 试剂二:临用前取一支试剂二加1 mL蒸馏水充分溶解,未用完的试剂2-8℃可以保存2周。(为了延长使用时间,因此多给一支试剂二)
AAT是一个多功能蛋白大家族,主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应,在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。
AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇,同时还原DTNB生成TNB;TNB在412nm有吸收峰,测定412 nm吸光度增加速率,来计算AAT活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料”附件
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。4℃,15000 g离心20min,取上清液待测。
2、血清(浆)样本:直接检测。(若液体有浑浊则离心后进行测定)
二、测定步骤
- 分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。
- 试剂一在37℃水浴保温20 min以上。
- 样本测定:
| 试剂名称(μL) | 空白管 | 测定管 |
| 蒸馏水 | 20 | - |
| 上清液/血清 | - | 20 |
| 试剂一(预热) | 140 | 140 |
| 试剂二 | 10 | 10 |
| 试剂三 | 20 | 20 |
| 试剂四 | 10 | 10 |
注意事项:
- 上清液蛋白质含量需要另外测定。
- 当吸光值大于1时,建议稀释后测量。
- 建议一个一个样本测定,一人比色一人计时。
- 如果ΔA测小于0.01,可以延长反应时间,如测定10 s和310 s的吸光度,相应修改计算公式中反应时间。
- 取0.1g肾脏加入1mL提取液进行样本处理,取上清后稀释4倍后按测定步骤操作,用微量石英比色皿测得ΔA空=A2空-A1空=0.0849-0.08=0.0049、ΔA测=A2测-A1测=0.69-0.4929=0.1971、ΔA=ΔA测-ΔA空=0.1971-0.0049 =0.1922,按样本质量计算酶活得:AAT (U/g 质量) =5000×ΔA÷W×4(稀释倍数)=38440 U/g 质量。
- 取兔血清直接按照测定步骤操作,测得ΔA空=A2空-A1空=0.0849-0.08=0.0049、ΔA测=A2测-A1测=0.629-0.5342 =0.0948、ΔA=ΔA测-ΔA空=0.0948-0.0049=0.0899,按血清体积计算酶活得:AAT (U/mL 血清) =5000×ΔA=5000×0.0899=449.5 U/mL 血清。
BC0590/BC0595 游离脂肪酸(FFA)含量检测试剂盒
BC1080/BC1085 乙醇脱氢酶(ADH)活性检测试剂盒
BC0320/BC0325 植物中脂氧合酶(LOX)活性检测试剂盒
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文献和实验| AuthorLiu Danfeng, Liu Yunshan, Liu Maoye, Geng Yupeng, Zhang Yongjun, Siemann Evan, Li Bo, Wang Yi | Publish_toJOURNAL OF PEST SCIENCE |
| IF4.8000 | PMID |
) 用乙酰辅酶 a 的乙酰基取代氨基酸。这种类型的乙酰化是共翻译的,因为 N 端在仍与核糖体相连的生长中的多肽链上乙酰化。虽然 80 至 90% 的真核细胞蛋白以这种方式乙酰化,但其确切的生物学意义仍不清楚。组蛋白 N 末端赖氨酸的ε-NH2 乙酰化(简称赖氨酸乙酰化)是调节基因转录的常用方法。组蛋白乙酰化是一个可逆的事件,可减少染色体浓缩以促进转录,这些赖氨酸残基的乙酰化受含有组蛋白乙酰转移酶 (HAT) 活性的转录因子调控。而具有 HAT 活性的转录因子作为转录共激活因子,组蛋白
化的平衡失调与肿瘤发生和癌症进展有关。 酶调节 乙酰基被组蛋白乙酰转移酶 (HAT) 添加到组蛋白 H3 和 H4 的赖氨酸残基上,并被去乙酰化酶 (HDAC) 除去。组蛋白乙酰化主要靶向启动子区域,称为启动子局部乙酰化。例如,组蛋白 H3(H3K9ac 和 H3K27ac)上 K9 和 K27 的乙酰化通常与活性基因的增强子和启动子有关。转录基因中也发现了 低水平的整体乙酰化,但其功能尚不清楚。 甲基化 组蛋白 H3 和 H4 的赖氨酸或精氨酸残基被甲基化,对转录有不同的影响。精氨酸甲基
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的偏好,并提供对 MBOAT 家族中酶催化机制的见解。 图片来自:Nature 3. 揭示人源二酰甘油酰基转移酶 (DGAT1) 三维结构及催化机制同期,2020 年 5 月 13 日,颜宁及周鸣团队在 Nature 在线发表题为 Structure and mechanism of human diacylglycerol O-acyltransferase 1 的研究论文,该工作利用单颗粒冷冻电镜技术, 首次解析了分辨率为 3.1Å 人源 DGAT1 的同源二聚体结构,并结合酶活性实验,确定











