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酰基转移酶(AAT)活性检测试剂盒 微量法

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  • ¥6450
  • Solarbio已认证
  • 北京
  • BC2355
  • 2025年07月16日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20℃

    • 保质期

      6个月

    • 英文名

      Acyltransferase(AAT) Activity Assay Kit

    • 库存

      99

    • 供应商

      北京索莱宝科技有限公司

    • CAS号

      BC2355-100T/96S

    • 规格

      100管/96样

    酰基转移酶(AAT)活性检测试剂盒说明书
    微量法
    注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
    货号:BC2355
    规格:100T/96S
    产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
    试剂名称 规格 保存条件
    提取液 液体110 mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂一 液体15 mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂二 粉剂×2 -20℃保存
    试剂三 液体3 mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂四 液体1.5 mL×1支 2-8℃保存
    溶液的配制:
    1. 提取液:内含不溶物,使用前摇匀。
    2. 试剂二:临用前取一支试剂二加1 mL蒸馏水充分溶解,未用完的试剂2-8℃可以保存2周。(为了延长使用时间,因此多给一支试剂二)
    产品说明:
    AAT是一个多功能蛋白大家族,主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应,在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。
    AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇,同时还原DTNB生成TNBTNB412nm有吸收峰,测定412 nm吸光度增加速率,来计算AAT活性。

    注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
    需自备的仪器和用品:
    可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
    操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料”附件
    一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
    1组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行浴匀浆。4℃,15000 g离心20min,上清液待测
    2血清(浆)样本:直接检测。(若液体有浑浊则离心后进行测定)
    二、测定步骤
    1. 分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。
    2. 试剂一在37℃水浴保温20 min以上。
    3. 样本测定:
    试剂名称(μL 空白管 测定管
    蒸馏水 20 -
    上清液/血清 - 20
    试剂一(预热) 140 140
    试剂二 10 10
    试剂三 20 20
    试剂四 10 10
    将上述试剂按顺序加入微量石英比色皿/96孔板中,加试剂四的同时开始计时,在412nm波长下记录10s时的初始吸光度A1130s后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1空;ΔA=A2-A1测,ΔA=ΔA测-ΔA空。空白管只需做1-2次。

    注意事项:
    1. 上清液蛋白质含量需要另外测定。
    2. 当吸光值大于1时,建议稀释后测量。
    3. 建议一个一个样本测定,一人比色一人计时。
    4. 如果ΔA小于0.01,可以延长反应时间,如测定10 s310 s的吸光度,相应修改计算公式中反应时间。
    实验实例:
    1. 取0.1g肾脏加入1mL提取液进行样本处理,取上清后稀释4倍后按测定步骤操作,用微量石英比色皿测得ΔA=A2-A1=0.0849-0.08=0.0049ΔA=A2-A1=0.69-0.4929=0.1971ΔA=ΔA-ΔA=0.1971-0.0049 =0.1922,按样本质量计算酶活得:AAT (U/g 质量) =5000×ΔA÷W×4(稀释倍数)=38440 U/g 质量。
    2. 取兔血清直接按照测定步骤操作,测得ΔA=A2-A1=0.0849-0.08=0.0049ΔA=A2-A1=0.629-0.5342 =0.0948、ΔA=ΔA-ΔA=0.0948-0.0049=0.0899,按血清体积计算酶活得:AAT (U/mL 血清) =5000×ΔA=5000×0.0899=449.5 U/mL 血清。
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    图标文献和实验
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