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γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)检测试剂盒 可见分光光

度法
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  • ¥340
  • Solarbio已认证
  • 北京
  • BC1210
  • 2026年02月26日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20℃

    • 保质期

      6个月

    • 英文名

      Thioredoxin Peroxidase (TPX) Assay Kit

    • 库存

      99

    • 供应商

      北京索莱宝科技有限公司

    • CAS号

      BC1210-50T/24S

    • 规格

      50管/24样


    γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)活性检测试剂盒说明书
    可见分光光度法
    注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
    货号BC1210
    规格50T/24S
    产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
    试剂名称 规格 保存条件
    试剂一 液体45 mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂二A 液体15mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂二B 粉剂×1 -20℃保存
    试剂三 粉剂×1 2-8℃保存
    试剂四 液体20 mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂五 粉剂×1 2-8℃保存
    试剂 粉剂×1 2-8℃保存
    试剂 液体10 mL×1瓶 2-8℃保存
    标准品 液体1 mL×1支 2-8℃保存
    溶液的配制:
    1. 试剂二B:临用前加6 mL蒸馏水充分震荡溶解,用不完的试剂-20℃分装保存4周,禁止反复冻融;
    2. 试剂二的配制:临用前根据样本量按试剂二A:试剂二B=1.3mL0.52mL(共1.82mL7T)的比例配制,现用现配,当天用完。
    3. 试剂三:临用前加5 mL蒸馏水充分震荡溶解,2-8℃可以保存4周;
    4. 试剂五:临用前加入10 mL蒸馏水溶解,用不完的试剂2-8℃保存2
    5. 试剂六:临用前加入10 mL蒸馏水溶解,用不完的试剂2-8℃保存2
    6. 工作液:临用前根据样本量试剂五:试剂六:试剂=0.5mL0.5mL0.5mL(共1.5mL3T的比例配制,配好的工作液应为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,限当天使用。(注意:配制工作液最好使用新的烧杯、玻璃棒玻璃移液器,或者一次性塑料器皿,以避免磷污染。
    7. 标准品:10 μmol/mL磷标准溶液。
    8. 0.1μmol/mL磷标准溶液的配制:临用前0.1mL 10 μmol/mL标准液0.9mL蒸馏水混合,配制浓度为1 μmol/mL;再取0.1mL 1 μmol/mL标准液0.9mL蒸馏水混合配制成0.1μmol/mL磷标准溶液使用。
    产品说明:
    GCL(glutamate cysteine ligase)是GSH合成的限速酶,GSHGCL有反馈抑制作用。GCL基因表达受多种因素调节,如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL活性高低对GSH含量和GSH/*比值有重要影响。

    在ATP和Mg2+存在下,GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸;同时ATP去磷酸化产生无机磷分子,通过测定无机磷增加速率,即可计算出GCL活性。

    注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
    需自备的仪器和用品:
    可见分光光度计、冷冻离心机、水浴锅/恒温培养箱、移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪和蒸馏水。
    操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料”附件
    注意事项:
    1. 样本处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力,以免影响其活力。如果是匀浆液,避免反复冻融。
    2. 样本测定前先取1-2个样做预实验,如吸光值大于1,应先用试剂一(或者生理盐水)稀释到适当倍数,哺乳动物组织和血液一般稀释3-5倍。
    3. 细胞中GCL活性测定时,细胞数目须在300-500万之间,细胞中GCL的提取时可加试剂一(或生理盐水)后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞。
    4. 测定吸光值时请于水浴后10-40分钟内测完。
    实验实例:
    1. 取0.1g柳树加入1mL试剂一进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上按照测定步骤操作,测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.923-0.635=0.288ΔA= A标准管-A空白管=0.514-0.002=0.512,按样本质量计算酶活得:
    GCL(U/g 质量)=0.0544×ΔA÷ΔA÷W=0.306 U/g 质量。
    1. 取0.1g脾脏加入1mL试剂一进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清稀释5倍,置冰上按照测定步骤操作,测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.713-0.285=0.428ΔA=A标准管-A空白管=0.514-0.002=0.512按样本质量计算酶活得:
    GCL(U/g 质量)=0.0544×ΔA÷ΔA÷W×5(稀释倍数)=2.274 U/g 质量。
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    图标文献和实验
    该产品被引用文献
    SNORA56-mediated pseudouridylation of 28?S rRNA inhibits ferroptosis and promotes colorectal cancer proliferation by enhancing GCLC translation点击查看
    AuthorXu Chang, Bian Zhixuan, Wang Xinyue, Niu Na, Liu Li, Xiao Yixuan, Zhu Jiabei, Huang Nan, Zhang Yue, Chen Yan, Wu Qi, Sun Fenyong, Zhu Xiaoli, Pan QiuhuiPublish_toJOURNAL OF EXPERIMENTAL & CLINICAL CANCER RESEARCH
    IF11.3000PMID38049865
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