BL21(DE3)pLysS感受态细胞

特别提示：包括BL21(DE3)pLysS感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：BL21(DE3)pLysS感受态细胞
英文名称：BL21(DE3)pLysS Competent Cell
产品货号：WE0254
产品规格：100μl×10支

  本产品是大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。该菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107。

产品组成：

组份	0.1ml×10支
BL21(DE3)pLysS Competent Cell	10×100μl
Control DNA pUC19，0.1ng/μl	10μl

实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

使用方法：
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意：
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

储存条件：-80℃。

除了BL21(DE3)pLysS感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：



名称：即用型蓝白T载体C型(T7-T3，无MCS)
货号：BTN120513
规格：20次
本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段，其两个末端的5′都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：
1. 由于是通过酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3. 无Nde I和Nco I等多克隆位点，便于重组基因的克隆
4. 来源于pBlueSoript Ⅱsk(+)，故克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1复制起始子，可以制备单链DNA。

产品组成：

组分	规格
即用型蓝白T载体C型(10ng/μL)	60μl
阳性对照(35ng/μl)	30μl

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

质粒图谱


名称：衣霉素溶液
货号：BTN120702
规格：1mL
本产品为5mg/mL的衣霉素溶液，溶剂为*醇。衣霉素(链病毒菌素；Nsc177382；Aids010655)，分子式：C37H60N4O16，分子量：816.89，CAS号：11089-65-9 。为放线菌Streptomyces lysosuperficus产生的核苷酸抗生素。可抑制具有被膜(envelope，含糖蛋白)的病毒的繁殖。作用机理是抑制合成糖蛋白糖链必需的拟脂(多萜醇，dolichol)中间产物的生成。常作为研究糖蛋白的工具，能通过抑制N-乙酰氨基葡萄糖-1-磷酸到一磷酸长醇的转移从而阻止糖蛋白的形成。

储存条件：低温运输，4℃避光保存，有效期6个月。

名称：酵母质粒小量抽提试剂盒
货号：YT004
规格：50次
本试剂盒是一种使用破壁酶消化去除酵母细胞壁，然后采用一种新型的酵母质粒纯化柱实现从酵母细胞中进行小量质粒快速抽提的试剂盒。无需酚*仿抽提，无需酒精沉淀，12个样品只需约1-1.5小时即可完成。

本试剂盒提供了破壁酶，酵母收集后，加入Lyticase消化去除细胞壁，接着采用传统碱裂法裂解细胞，然后将获得的上清液转移至结合柱结合DNA，经过离心快速洗涤，最后用洗脱液洗脱出酵母质粒DNA。由于采用了高浓度的破壁酶，无需再使用玻璃珠，可以避免因为玻璃珠的机械作用带来的酵母基因组DNA污染。

每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限约为20微克。质粒DNA的产量依赖于酵母携带质粒的拷贝数，酵母菌株以及生长条件。通常酵母质粒的拷贝数较低，1.5-5ml培养过夜的酵母抽提获得的质粒DNA量约为1-3微克左右。高拷贝酵母质粒抽提时的得率会大大提高。抽提所得质粒的量与酵母培养浓度、质粒拷贝数、酵母品系等因素有关。

使用本试剂盒抽提得到的酵母质粒DNA可用于各种常规分子生物学实验，如转化、PCR、基于PCR的突变、体外转录、酶切、测序、文库筛选等。

产品组份：
酶解缓冲液——————————————10ml
溶液Ⅰ(悬浮液)————————————15ml
溶液Ⅱ(裂解液)————————————15ml
溶液Ⅲ (结合液)————————————20ml
溶液Ⅳ (洗涤液)————————————18ml (第一次使用前每瓶加入27ml无水乙醇)
溶液Ⅴ (洗脱液)————————————3ml
RNase A (100mg/ml)——————————15μl
Lyticase———————————————1管
Lyticase配制液————————————1.2ml
小抽质粒纯化柱及废液收集管——————50套

注意事项：
1）第一次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加到溶液Ⅰ(悬浮液)中，混匀，并在瓶上做好标记。加入RNase A后4℃存放。
2）第一次使用前在每瓶溶液Ⅳ(洗涤液)中加入27ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
3）第一次使用前吸取1ml Lyticase配制液到Lyticase粉末中，完全溶解后即为Lyticas溶液。配制好的Lyticase溶液4℃可以保存1个月，-20℃可以保存6个月。如需-20℃保存，最好能适当分装。Lyticase溶液配制后或冻存后再溶解可能会出现轻微混浊，属正常现象，请混匀后使用。
4）温度较低时，溶液Ⅱ和溶液Ⅲ可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，37℃水浴加热溶解，混匀后使用。溶液Ⅱ请勿过分剧烈混匀，否则会产生大量气泡。
5）溶液Ⅱ使用完后，一定要盖紧瓶盖，防止被空气中二氧化碳酸化。
6）溶液II有强碱性，溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和Lyticase对人体都有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护。
7）本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
8）废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。
9）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：室温，有效期一年。（其中，Lyticase需-20℃保存）