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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月,-80°C不超过3788个月
- 规格:
50ug/100ug
- 物种Homo sapiens (Human,人) 相同的名称,不同的物种。
- 来源原核表达
- 宿主E.coli
- 内毒素水平<1.0EU/µg(LAL法测定)
- 亚细胞定位n/a
- 预测分子量-
- 实际分子量-(差异分析请参阅说明书)
- 片段与标签N-terminal His Tag
- 缓冲液成份磷酸盐缓冲液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
- 性状冻干粉
- 纯度> 95%
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文献和实验过程中使微萃取柱中金属离子树脂充分重悬,打出液体,如此反复吸打数次,最后排空弃掉结合缓冲液;(5) 目的蛋白洗脱 :一次或分多次吸入含磷酸钠,NaCl,咪唑的洗脱缓冲液,吸液过程中使微萃取柱中金属离子树脂充分悬浮,然后打出液体,如此反复吸打数次,最后将液体排出到干净的样品管中,即为纯化得到的蛋白溶液;(6) 脱盐:步骤 (5) 纯化过的蛋白溶液可通过 MicroSep® Size X tips 产品进行高通量自动化脱盐。图 4 MicroSep® Ni tips 纯化流程推荐方案 1:利用
X-100或脱氧胆酸钠)和低浓度变性剂(2mol/L尿素或盐酸胍等)洗涤除去脂类和膜蛋白,这一步很重要,否则会导致包涵体溶解和复性的过程中重组蛋白质的降解[6、7、8]。 包涵体的溶解必须用很强的变性剂,如8mol/L尿素、6~8mol/L盐酸胍,通过离子间的相互作用破坏包涵体蛋白间的氢键而增溶蛋白。其中尿素的增溶效果稍差,异氰盐酸胍最强;去污剂,如SDS[7],可以破坏蛋白内的疏水键,可以增溶几乎所有的蛋白,但由于无法彻底去除而不允许用在制药行业中;酸,如70%甲酸[9],可以破坏蛋白
1 介绍用于生产治疗性重组蛋白的哺乳动物补料批次细胞培养物的性能和产量取决于细胞对变化的培养环境的反应。广泛报道的一种提高哺乳动物细胞生产力的策略是基于在高渗条件下培养细胞的。例如,通过加入无机或有机渗透剂(如 NaCl 或山梨糖醇)来增加渗透压。但是,细胞比生产率的提高与细胞生长的降低相结合,通常不会在产品产量方面带来整体收益。双相分批培养或逐渐增加渗透压、渗透保护成分和随后的继代培养已被成功地用于克服细胞生长抑制的问题。然而,这些研究大多数是在分批条件下进行的,高渗透压对补料批次培养的影响
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