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- 文献和实验
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- 保存条件:
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月,-80°C不超过2692个月
- 规格:
50ug/100ug
- 物种Homo sapiens (Human,人) 相同的名称,不同的物种。
- 来源原核表达
- 宿主E.coli
- 内毒素水平<1.0EU/µg(LAL法测定)
- 亚细胞定位n/a
- 预测分子量-
- 实际分子量-(差异分析请参阅说明书)
- 片段与标签N-terminal His Tag
- 缓冲液成份磷酸盐缓冲液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
- 性状冻干粉
- 纯度> 97%
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文献和实验多种分子伴侣编码基因和通过激细胞内众多不同的分子伴侣的方法来实现。 2.在E.coli中表达真核膜蛋白和多亚基蛋白质复合物的难题上有待解决。 3. 蛋白质分泌到培养基中的真正和有效机制需要明了。目前已经有多种体系能够是重组蛋白质分泌到培养基中。其中有些是利用信号肽、融合伴侣和具有穿透能力的因子,这种因子能够引起外膜的破坏和有限的渗漏。而另外的策略是利用已经存在的分泌通道,来保证更高特异性的分泌。有关这方面的工作需要对E.coli中众多分泌通道的更多了解。 4. 赋予原核细胞诸如真核
化学合成( 选择细菌偏爱的密码子) (4)PCR 扩增 四、外源基因在大肠杆菌表达的主要方式 (一)从表达蛋白结构来分 1、天然蛋白直接表达: (1)基本条件: A、载体应有细菌核糖体的结合部位,不含有结构基因。 B、外源基因:含启始密码子 ATG及全基因。 来源:a. 化学合成 b. 化学合成DNA与酶促制备cDNA相结合 化学合成 + 酶切后的cDNA 用限制性切除目的基因信号肽,目的基因信号肽,目的基因部分氨基末端氨基酸和3’非翻译区。 c. PCR法:扩增不含内含子基因
,为E.coli中高效表达和纯化重组蛋白提供了极大方便。融合表达具有多方面的优点:如防止包涵体的形成,促进蛋白质的正确折叠,限制蛋白酶解和利于纯化[159,194]。 Uhlen和其同事[195]利用葡萄球菌A蛋白和合成的结构域(Z)开发了一种多功能的融合伴侣,除了能够作为纯化标记外,A蛋白组分还作为一种可溶性伴侣促进蛋白质的折叠,A蛋白信号肽的存在可使表达蛋白分泌到培养基中。另一个融合伴侣是链球菌G蛋白(SPG),它是一种细菌胞壁蛋白,在其氨基端具有分离的白蛋白结合区,在OH端具有免疫
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