一步法RT-qPCR试剂盒(荧光探针)

特别提示：包括一步法RT-qPCR试剂盒(荧光探针)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：一步法RT-qPCR试剂盒(荧光探针)
英文名称：Probe One-Step qRT-PCR UltraMix
产品货号：JN0053
产品规格：100次

  本试剂盒向PCR体系中添加了荧光探针（TaqMan或Molecular Beacon等），在扩增过程中，荧光量与扩增产物量成正比，因此可通过荧光量来测定样品核酸量。本制品以RNA为模板反转录合成cDNA第一链，然后再以合成的cDNA为模板，继续用基因特异性引物扩增，并用荧光探针进行检测。在同一反应体系中可完成从反转录到qPCR的全部过程。
  本制品采用的酶是HotStart Taq，并结合了特别的缓冲液体系，能有效抑制非特异性反应，在更广的范围内对核酸含量进行准确定量。

试剂盒组分：

组份	体积
2×BalbScript Probe One-Step qRT-PCR UltraMix	1ml支
BalbScript RT Enzyme Mix	100μl
RNase Free Water	1ml×2支
ROX Reference Dye I	200μl
ROX Reference Dye II	200μl

产品特点：
高特异性：采用特殊工艺制造的热启动HotStart Taq DNA聚合酶，大大提高了PCR扩增的特异性。
高效：百奥莱博精心配制的RealTime PCR专用试剂，具有更高扩增效率和灵敏度。

使用建议：
请将体系上下颠倒混匀，动作轻柔，避免起泡，并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头及Microtube等，尽量避免污染。
·用ROX Reference Dye I校准的Real Time PCR仪有：
Applied Biosystems 5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast；Applied Biosystems StepOne/StepOne Plus；其他仪器。
·用ROX Reference Dye II校准的Real Time PCR仪有：
Applied Biosystems 7500/7500 Fast；Stratagene MX4000/MX3500P/MX3000P；其他仪器。
·不需要用ROX Reference Dye校准的Real Time PCR仪有：
Bio-Rad CFX96/CFX 384/iCycler iQ5/ iQ /My iQ5/MiniOpticon/Opticon/Opticon /Chromo4；Eppendorf MasterCycler realplex/ realplex 2s。Cepheid SmartCycler；Illumina Eco qPCR；R℃he Applied Science LightCycler 480；Thermo Scientific PikoReal Cycler；Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/ Rotor-Gene 6000；其他仪器。

常用反应体系（20μl）：

加入物	加入量
2×BalbScript Probe One-Step qRT-PCR UltraMix	10μl
BalbScriptR RT Enzyme Mix	1μl
上游引物	0.2-1.0μM（终浓度）
下游引物	0.2-1.0μM（终浓度）
探针 10uM	0.4μl
模板	1pg～1μg
RNase Free Water	至20μl

常用PCR循环：

两步法扩增程序（推荐）：
42℃	30min
94℃	5min
35-40次循环	95℃，15s 60℃，1min
三步法PCR扩增程序(引物Tm值较低或其他原因)：
42℃	30min
94℃	5min
35-40次循环	95℃，15s 57℃，20s 72℃，30s

储存条件：-20℃

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