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文献和实验。 图 1. 富集质膜组分后检测跨膜蛋白更易检出：目的蛋白 SGL1 是跨膜蛋白，使用总膜蛋白检测困难，使用柱式法质膜及细胞组分分离试剂盒富集质膜后再检测质膜组分，可以显著提高 SGL1 的检出效率。 （图片来源：Kashiwagi Y，2015，PLoS ONE 10(6)：e0130605. doi：10.1371/journal.pone.0130605.） （3）有条件诱导目的蛋白表达 如果通过增溶目的蛋白或分离亚细胞结构富集目的蛋白，仍无法得到 WB 条带，可通过查阅相关
，首先使用 Invent 柱式法胞质胞核分离试剂盒将样品分为胞浆蛋白和胞核蛋白，每组按照胞浆组分，胞核组分顺序分别上样，使用 GAPDH 作为胞浆内参，LaminA/C 作为胞核内参，验证胞质胞核分离成功无交叉污染。 检测目标蛋白 NF-ĸB p65，验证了过表达 circ-Sirt1 的血管平滑肌细胞（VSMCs）中，TNF-ɑ 诱导的 NF-ĸB p65 的核易位被显著抑制，并伴有促炎细胞因子和黏附分子表达减少（图 E）。相反，敲低内源性 circ-Sirt1 增强了 TNF-ɑ 诱导的 NF-ĸB
，即切胶的那次电泳中，如果切成的条带很清晰，不拖泥带水，没有弥散，没有拖尾，那做回收、连接效果最好。相反，若有弥散、拖尾、不清楚、一团亮等情况就是切的不好，做后续实验成功率会降低。若真是效果很差建议改进体系重新切。 回收 回收可以用柱式试剂盒或手工法。柱式回收试剂盒：此类试剂盒适合各种长度 DNA，对黏性末端基本没有破坏，回收效率也不错。手工醇沉淀法步骤如下，把切得的胶弄碎，用 Tris-HCl 浸泡一段时间，吸出所有的液体，用酚抽提一遍，氯仿抽提一遍，加盐和醇醇沉，沉淀
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