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如何做好 Southern 杂交？

Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的 DNA 样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相 DNA 的位置上显示出杂交信号。通过 Southern 杂交可以判断被检测的 DNA 样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA 指纹分析和 PCR 产物判断等研究中。但由于该技术的操作比较烦琐、费时，所以现在有一些其他的方法可以代替 Southern 杂交。但该技术也有它的独特之处，是目前其他方法

SOUTHERN BLOTTING

in between two sheets of Whatman 3 mm for 2 hours @ 80℃ in a vacuum oven. Afterb akingt,h ef ilteirs r eadyt ob ep rehybridizeadn dh ybridizewd ith the desired probe. References: Southern, E.M. (1975) Detection of specific sequences among DNA fragments separated

Southern Blot

1. Run gel (0.8 -1.0% agarose is best). For yeast chromosomal Southerns, digest 20 μg DNA. Use 50 ml minigel for most purposes. Photograph gel, but minimize exposure to UV light.2. Depurination: Place gel in 250 mls 0.25M HCl.(250 mls = 11 mls 5.8M