辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯

特别提示：包括辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯
英文名称：Glycerides, C8-10 mono- and di-
产品货号：Y15301
产品规格：25g

CAS：85536-07-8
储存条件：RT

除了辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯，我公司还供应以下相关产品：



名称：环氧活化-琼脂糖凝胶6B
货号：QN3991
规格：25ml
环氧活化-琼脂糖凝胶6B以6%琼脂糖凝胶为基质，采用环氧活化的方法激活琼脂糖上的羟基，活化后即可直接用于各种配基的偶联。可用于各种含有氨基、巯基或羟基的亲和配基(蛋白质、多肽、氨基酸或糖等)的偶联。具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广的特点。

基质：6%高度交联琼脂糖凝胶
功能基团：epoxy
配基密度：20～40μM drained matrix
平均粒径：90μm
zuì大流速：300cm/h
偶联条件：pH8～10,温度4～45℃,时间1～16小时，可在水相和有机相中偶联
用途：亲和层析介质
性状：白色胶体；
储存温度：4～8℃

使用说明：
1．溶液的准备
偶联液：0.1M Na2CO3, pH8.5～10.0
封闭液：1M 乙*胺，pH8.0
清洗液1：0.1M 乙酸-乙酸钠，0.5M NaCl，pH4.0
清洗液2：0.1M Tris-HCl，0.5M NaCl，pH8.0
保护液：含20%乙醇的1XPBS
2．样品准备
样品用偶联液溶解，浓度约5～10mg/ml。
3．样品偶联
① 取适量的环氧活化-琼脂糖凝胶6B，去除保护液，离子水清洗三次，用偶联液清洗一次。
② 将溶解好的样品中溶解后转入清洗好的环氧活化-琼脂糖凝胶6B中，填料：样品溶液体积比约为1:1。
③ 25-40℃摇床中振荡混合反应24h。注：确保树脂悬浮起来，否则会大大影响偶联效率。
④ 反应完后收集偶联样品，以便检测偶联效率。偶联液清洗一遍。
⑤ 加入等体积的封闭液，37℃振荡混合反应1h。
⑥ 将上述反应体系取出，流干其中的溶液，用3 倍柱体积的去离子水清洗树脂，清洗液1、去离子水、清洗液2和去离子水重复冲洗2次，然后保存在等体积的保护液中，于2℃～8℃保存。

注意事项：
1．不同配基的偶联方法与上面类似，但是反应的条件例如：配基加入量，反应时间，反应温度应根据配基的不同进行适当的调整；
2．可用碳酸盐、硼*盐和磷酸盐缓冲液做为偶联缓冲液，但绝对不能使用含有氨基的Tris、甘氨酸的缓冲液。

名称：苯甲脒-琼脂糖凝胶6B
货号：QN4063
规格：25ml
储存条件：4℃
外观：颗粒

名称：谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4FF
货号：QN4066
规格：10ml
pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。树脂用3mol/L NaCl的缓冲液再生。谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白）。

技术参数：
粒度：45～165µm
流速：75cm/h
工作PH：pH4.0～10.0
耐压：0.3Mpa
载量：＞10mg谷胱甘肽S-转移酶

使用说明：
一、谷胱甘肽树脂的处理：
1．轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。
2．取部分匀浆放入15mL聚*烯管（每100mL细菌培养物大约需要2mL匀浆）。
3．4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
4．在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
5．每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。
二、制备细胞抽提物：
6．每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。
7．加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。
8．用针筒将10mL浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5μg/mL,4℃振动温育10分钟，4℃ 3000g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。
三、纯化融合蛋白：
9．细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mL树脂，于室温轻摇30min。
10．混合物于4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚*烯酰胺凝胶电泳。
11．沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。
12．4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚*烯酰胺凝胶电泳。
13．重复步骤11和12两次。
14．结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa因子切割，释放靶蛋白。
四、用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：
15．沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白。
16．4℃以500g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。
17．重复步骤a和b两次，合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
18．在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mL树脂加入50单位溶于1mL PBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2～16小时。用小规模实验确定精确时间。
19．4℃以500g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）
20．10% SDS聚*烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。
  试剂配制：
  谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)