TOP10电击感受态细胞

特别提示：包括TOP10电击感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：TOP10电击感受态细胞
英文名称：TOP10 Electroporation-Competent Cell
产品货号：MQ0026
产品规格：5×50μl/20×50μl

TOP10电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。TOP10来源于MC1061菌株，是目前实验室最常用的感受态细胞之一，基因型与DH10B 高度类似(DH10B为galE15型，而TOP10为galU型)。TOP10生长速度快(比DH5α快，但比Mach1-T1生长速度慢)，10小时可见克隆。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验，具有链霉素抗性。TOP10电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达1×1010 cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL(Strr)endA1 nupG
操作说明：
1.0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2.取-80℃保存的TOP10电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
A.测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒pUC19；
B.对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。
3.用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV(此为BioRad电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作)，将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5.2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入1ml不含抗生素的无菌S.O.C.培养基(室温)，用1ml枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50 ml离心管(BD Falcon 50 ml锥形离心管等)，向离心管中补加S.O.C.培养基至10 ml。倾斜45度放入摇床，37℃，225 rpm复苏60分钟。
6.5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上(因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。
注意事项：
1.加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3.当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4.电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5.若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6.对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重悬产物，保证 DNA浓度不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7.混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

除了TOP10电击感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：



名称：cl857 Sam7 λDNA(非甲基化)
货号：BTN90407C
规格：5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。

储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。

名称：多粘菌素B硫酸盐
货号：BTN120699
规格：5mL
本产品为浓度100mg/mL的多粘菌素B硫酸盐溶液。多粘菌素B硫酸盐(硫酸多粘菌素B ；Aerosporin；Mastimyxin)，分子式：C55H96N16O13·2H2SO4，分子量：1385.63，CAS号：1405-20-5。多粘菌素B为多肽类抗生素，可以改变膜结构使小分子物质泄漏而抑制革兰氏阴性菌的生长。

储存条件：低温运输，4℃避光保存，有效期6个月。

名称：酵母质粒小量抽提试剂盒
货号：YT004
规格：50次
本试剂盒是一种使用破壁酶消化去除酵母细胞壁，然后采用一种新型的酵母质粒纯化柱实现从酵母细胞中进行小量质粒快速抽提的试剂盒。无需酚氯*抽提，无需酒精沉淀，12个样品只需约1-1.5小时即可完成。

本试剂盒提供了破壁酶，酵母收集后，加入Lyticase消化去除细胞壁，接着采用传统碱裂法裂解细胞，然后将获得的上清液转移至结合柱结合DNA，经过离心快速洗涤，最后用洗脱液洗脱出酵母质粒DNA。由于采用了高浓度的破壁酶，无需再使用玻璃珠，可以避免因为玻璃珠的机械作用带来的酵母基因组DNA污染。

每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限约为20微克。质粒DNA的产量依赖于酵母携带质粒的拷贝数，酵母菌株以及生长条件。通常酵母质粒的拷贝数较低，1.5-5ml培养过夜的酵母抽提获得的质粒DNA量约为1-3微克左右。高拷贝酵母质粒抽提时的得率会大大提高。抽提所得质粒的量与酵母培养浓度、质粒拷贝数、酵母品系等因素有关。

使用本试剂盒抽提得到的酵母质粒DNA可用于各种常规分子生物学实验，如转化、PCR、基于PCR的突变、体外转录、酶切、测序、文库筛选等。

产品组份：
酶解缓冲液——————————————10ml
溶液Ⅰ(悬浮液)————————————15ml
溶液Ⅱ(裂解液)————————————15ml
溶液Ⅲ (结合液)————————————20ml
溶液Ⅳ (洗涤液)————————————18ml (第一次使用前每瓶加入27ml无水乙醇)
溶液Ⅴ (洗脱液)————————————3ml
RNase A (100mg/ml)——————————15μl
Lyticase———————————————1管
Lyticase配制液————————————1.2ml
小抽质粒纯化柱及废液收集管——————50套

注意事项：
1）第一次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加到溶液Ⅰ(悬浮液)中，混匀，并在瓶上做好标记。加入RNase A后4℃存放。
2）第一次使用前在每瓶溶液Ⅳ(洗涤液)中加入27ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
3）第一次使用前吸取1ml Lyticase配制液到Lyticase粉末中，完全溶解后即为Lyticas溶液。配制好的Lyticase溶液4℃可以保存1个月，-20℃可以保存6个月。如需-20℃保存，最好能适当分装。Lyticase溶液配制后或冻存后再溶解可能会出现轻微混浊，属正常现象，请混匀后使用。
4）温度较低时，溶液Ⅱ和溶液Ⅲ可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，37℃水浴加热溶解，混匀后使用。溶液Ⅱ请勿过分剧烈混匀，否则会产生大量气泡。
5）溶液Ⅱ使用完后，一定要盖紧瓶盖，防止被空气中二氧化碳酸化。
6）溶液II有强碱性，溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和Lyticase对人体都有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护。
7）本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
8）废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。
9）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：室温，有效期一年。（其中，Lyticase需-20℃保存）