RecA 蛋白在基因重组中是不可缺少的,它参与 DNA 修复和紫外线诱导的突变。RecA 促进 lexA 抑制子、umuD 蛋白和 lambda 抑制子的自裂解。切割 LexA 能促进 20 多种基因的表达。体外研究证明:在 ATP 参与下,RecA 促进单链 DNA 片断与同源双链 DNA 片断发生链置换。上述反应需要三步来完成:(i)RecA 与单链 DNA 结合;(ii)核蛋白丝结合到双链 DNA 上寻找同源部分;(iii)链置换。
来源
重组 E. coli 菌株 ER2502,携带有从 E. coli 克隆的 recA 基因。
RecAf 是由 E. coli 菌株 ER3010 表达的 N 端 含 6X His标签的重组蛋白,该菌株编码有全长 353 个氨基酸的野生型E. coli RecA 蛋白。
反应条件
1X RecA 反应缓冲液
[70 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2,5 mM DTT(pH 7.6 @ 25℃)],37℃ 温育。 热失活:65℃ 加热 20 分钟。