Accutase Enzyme（ Accutase酶，贴壁细

背景简介

Accutase 是一种天然的酶，兼具蛋白水解酶和胶原酶的活性。但它比胰酶和胶原酶更有效，使用浓度更低，使之毒性更小、更温和。因此对细胞的损伤更小，可减少因消化处理带来的假阳性。即便长时间消化，也可保持 90%以上的细胞活力。适合于各种贴壁细胞、胚胎和神经元干细胞等较敏感的细胞的消化。

验证的细胞包括 hESCs、fibroblasts、keratinocytes、vascular endothelial cells、hepatocytes、vascular smooth muscle cells、hepatocyte progenitors、primary chick embryo neuronal cells、bone marrow stem cells、adherent CHO and BHK cells、macrophages、293 cells、L929 cells、immortalized mouse testicular germ cells、3T3、Vero、COS、HeLa、NT2、MG63、M24 and A375 metastatic melanoma、gliomas U251 and D54、HT1080 fibrosarcoma cells 和 Sf9 insect cells。

产品特点

• 细胞损伤小：可取代胰酶，更适用于贴壁细胞和较敏感的细胞
• 细胞活力高：通常消化 5-10 分钟即可完成，即便消化时间长达 1 小时，仍能保持细胞的高活力
• 保护大部分表位不受破坏，可用于后续流式检测
• 操作简便：使用时无需温育至 37℃，无需中止即可进行后续实验

使用方法

将 Accutase 于 4℃或室温解冻，切勿放于 37℃解冻。

贴壁细胞消化

1. 小心吸去细胞培养基 (如需检测凋亡细胞，则应收集培养上清中的细胞)。
2. (可选) 无菌 PBS 洗涤。
3. 加入适量解冻的 Accutase (不必温热至 37℃)，覆盖住细胞。根据细胞汇合度和密度情况，通常在 T25 细胞瓶中加入 2.5 - 5 ml Accutase。
4. 室温放置 5 - 10 分钟，至多可长达 1 小时，无需终止。
5. 当细胞开始圆缩，用手掌轻拍培养瓶，使细胞脱落。
6. 温和地吹散细胞，收集细胞。

原代巨噬细胞消化

1. 小心吸去细胞培养基 (如需检测凋亡细胞，则应收集培养上清中的细胞)。
2. 无菌 PBS 洗涤一次。
3. 加入适量解冻的 Accutase (不必温热至 37℃)，覆盖住细胞。在 T25 细胞瓶或 15 mm 培养皿中通常加入 5 ml Accutase。
4. 室温孵育 10 - 15 分钟。观察细胞是否圆缩或脱落。
5. 轻轻摇晃，再加入 5 ml Accutase，室温孵育 10 - 15 分钟。吹打数次重悬细胞，避免产生气泡。
6. 计数后，调整细胞浓度，进入后续实验。

人或大鼠神经干细胞(NCS)消化

1. 去除培养皿中的培养基，加入 2 ml Accutase。
2. 37℃孵育 2 - 5 分钟，直到单个细胞开始圆缩。
3. 轻轻润洗使细胞脱离平皿，转移至 15 ml 离心管，轻轻吹打，使之成为单个细胞的悬液。
4. 在培养皿中加入 8 ml 培养基润洗剩余的细胞，并入步骤 3 中的细胞悬液中。
5. 取 20 μl 细胞悬液，测定活细胞数量。
6. 200 ×g 离心 4 分钟，弃上清，用新鲜的培养基重悬后，转移至培养皿中，继续培养。

人或大鼠神经球消化

1. 将神经球细胞悬液从培养皿中转移至 15 ml 离心管。
2. 静置 2 - 5 分钟，使细胞沉积到管底。或者 100 ×g 离心 1 分钟。
3. 小心弃上清，留下约 100 μl 培养基。
4. 加入 5 ml DPBS 重悬，静置 2 - 5 分钟，使细胞沉积到管底。或者 100 ×g 离心 1 分钟。
5. 小心弃上清，留下约 100 μl 培养基。
6. 加入 1 ml Accutase，室温孵育 10 分钟。
7. 吹打数次，使神经球细胞呈单细胞。
8. 加入 4 ml 新鲜的培养基，200 ×g 离心 4 分钟。
9. 小心弃去上清，用新鲜的培养基重悬后，转移至新的培养皿中继续培养。