内质网蛋白提取试剂盒

特别提示：包括内质网蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：内质网蛋白提取试剂盒
英文名称：Endoplasmic reticulum protein extraction kit
产品货号：HR8008
产品规格：50T/100T

内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。
本试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的内质网蛋白的提取。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，需要除盐后再用于2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。

储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 使用前请仔细阅读产品说明书。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2．提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5．总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂耗材和仪器
● PBS ● 吸头、离心管 ● 移液器 ●冰盒 ●离心机 ● 涡旋振荡器 ●冰箱

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● zuì好使用Dounce 匀浆器匀浆，如果没有Dounce 匀浆器，用普通1ml 玻璃匀浆器匀浆也可。
● 要求离心力30000g-50000g的离心，zuì好能达到45000g 左右。zuì小离心力需要保证30000g里。若实验室离心机较小达不到30000g离心力，或者离心管质量不能承受30000g离心力，请使用能达到的zuì大离心力。此时内质网得率会相对较低。
细胞内质网蛋白提取：
1．提取液制备：
每200μl冷的蛋白提取液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
① 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
② 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
3．用冷PBS 洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．加入500μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
5．用Dounce 匀浆器匀浆充分匀浆，然后在4℃，1000g 力条件下离心5分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7.在4℃，11000g 力条件下离心10分钟，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
8.在4℃，30000g-50000g 力条件下离心45分钟。
9.在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
10.在4℃，30000g-50000g 力条件下离心45分钟。
11．弃上清，沉淀中加入100-200μl蛋白提取液C，混匀。
12.在4℃条件下振荡20-30分钟，至沉淀充分裂解，无明显沉淀。
13．即得到内质网蛋白样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
【注】：
① 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
②蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
组织内质网蛋白提取：
1．提取液制备：
每200μl冷的蛋白提取液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
① 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
② 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取50-100mg 新鲜动物组织样本，用PBS 洗涤干净。
3．用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS 洗涤两次。
4．加入500μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
5．用Dounce 匀浆器充分匀浆30-40 下，至无明显固体团块。然后在4℃，1000g力条件下离心5分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7.在4℃，11000g 力条件下离心10分钟，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
8.在4℃，30000g-50000g 力条件下离心45分钟。
9.在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
10.在4℃，30000g-50000g 力条件下离心45分钟。
11．弃上清，沉淀中加入100-200μl蛋白提取液C，混匀。
12.在4℃条件下振荡20-30分钟，至沉淀充分裂解，无明显沉淀。
13．即得到内质网蛋白样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
【注】：
① 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
②蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

除了内质网蛋白提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：SDS-PAGE分离胶配胶液
货号：BTN100868
规格：250mL
本产品专门用于配制非联续SDS-PAGE胶的分离胶，其浓度为4×，配胶时即开即用，非常方便。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

名称：蛋白示踪上样缓冲液(还原，5×)
货号：SNM451
规格：5ml

名称：通用型蛋白凝胶制备试剂盒
货号：ALH369
规格：20次|60次
本试剂盒利用聚丙*酰胺凝胶电泳原理，采用优化的预混合配方和通用分离/浓缩胶配制缓冲液，分离胶/浓缩胶可以同时一次配制完成。因此极大程度上简化了凝胶制备的操作流程，降低了实验人员接触剧毒试剂的机率。只需要一个凝胶制备系统，一小时内可以快速、方便、安全、稳定的配制出各种浓度的高质量的SDS-聚丙*酰胺凝胶,适用于各个实验室的蛋白电泳和制胶设备，比预制胶更加灵活、经济。

试剂盒组份(60次)：
4×PAGE buffer———————————75ml
Acr-Bis solution——————————120ml
APS-————————————————1ml×3
TEMED-———————————————300μl

注意事项：
1. 蛋白凝胶制作中的某些成分有毒性，如丙*酰胺和甲叉双丙*酰胺，因此制胶过程中必须带手套。
2. APS(过硫酸*)溶液容易失活，短时间内使用可放4℃冰箱，长期保存，应分装后放-20℃。

储存条件：4℃。

本制品别名：SDS-PAGE胶制备试剂盒|聚丙*酰胺凝胶制备试剂盒

名称：免疫染色封闭液
货号：KFS009
规格：100ml
免疫染色封闭液可以用于免疫染色时切片或细胞样品的封闭。封闭后，可以减小后续的一抗或二抗和样品的非特异性结合，降低背景，增强信噪比。

本免疫染色封闭液中含有适量Triton X-100，可以通透细胞膜。经本免疫染色封闭液处理的细胞样品可以检测细胞内的目的蛋白，包括细胞浆内和细胞核内的目的蛋白。

按照每组样品封闭需要5-10 毫升封闭液计算，一个包装的免疫染色封闭液可以封闭10-20 组样品。

操作方法:

对于切片或细胞样品，在固定后用免疫染色洗涤液洗涤一次(注：石蜡切片需先脱蜡)。然后就可以用免疫染色封闭液进行封闭。通常建议封闭60 分钟。封闭时可以在摇床上缓慢摇动。如果样品在摇动时容易脱落，也可以直接放置在桌面上不进行任何摇动，效果会略差一些，但也可以满足常规的要求。完成封闭后就可以进行一抗孵育等后续操作。

名称：细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒
货号：SY0326
规格：50T
细胞核蛋白、细胞浆蛋白在细胞研究和蛋白质组学中具有重要意义，因此在体外研究中需要将其从细胞或组织中分离。本试剂盒提供了一种较为简单方便，高效的蛋白抽提方法，其原理是：通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。zuì后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂C抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒1次可对2×106个细胞和30-50mg组织样品进行抽提，按照该使用量，SY0326可抽提50个样品。

产品组份：
胞浆蛋白抽提试剂A————10ml
胞浆蛋白抽提试剂B————0.5ml
胞核蛋白抽提试剂————2.5ml

储存条件：-20℃，有效期一年。

使用方法
将试剂盒各组分溶解后立即放置在冰上，混匀。取适量的胞浆蛋白抽提试剂A（以下统称：试剂A）和胞核蛋白抽提试剂（以下统称：试剂C）备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zuì终浓度为1mM。

1 细胞样品蛋白的抽提
1）细胞处理
对于贴壁细胞：PBS清洗细胞1次，EDTA溶液消化细胞或用细胞刮子刮下细胞，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽量吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
【注】：尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解抽提的目的蛋白。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，PBS清洗细胞1次，收集细胞，尽量吸尽上清，留细胞沉淀备用。
2） 每20µl细胞沉淀加入200µl含PMSF的试剂A。
【注】：对于2×106个Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为20µl或40mg。
3） zuì高速剧烈涡旋5s，完全悬浮分散细胞沉淀。
【注】：如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长旋涡震荡的时间。
4） 冰浴10-15min。
5） 加入胞浆蛋白抽提试剂B（以下统称：试剂B） 10µl。zuì高速剧烈涡旋5s，冰浴1min。
6） zuì高速剧涡旋5s，4℃12,000-16,000g离心5min。
7） 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，上清即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存备用。
【注】：此步千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免吸到沉淀。
8） 对于沉淀，完全吸尽残余上清，加入50µl含PMSF的试剂C。
【注】：此步需完全吸尽上清，否则会带来细胞浆蛋白的污染。
9） zuì高速剧烈涡旋15-30s，把沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1-2min再高速剧烈涡旋15-30s，共30min。10）4℃ 12,000-16,000g离心10min。
11）立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存备用。

2 组织样品的抽提
1） 将组织切成非常细小的碎片。根据后续使用量按照20:1的比例混合试剂A和B，并加入PMSF至zuì终浓度为1mM，混匀即可配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200µl组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液，并在玻璃匀浆器内充分匀浆。
【注】：匀浆需在冰浴或4℃进行。
2） 匀浆后将匀浆液转移至塑料离心管内，冰浴放置15min。
3） 4℃ 1,500g离心5min。把上清转移至一预冷的塑料管中，上清含部分细胞浆蛋白。
【注】：吸上清时千万不要触及沉淀。
4） 对于上述收集得到的沉淀，已经充分匀浆，但很多细胞仍没有破碎。接下来请参照【细胞样品蛋白抽提】的步骤2）开始操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，即可得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤【组织样品抽提】中步骤3）抽提得到的细胞浆蛋白合并备用。