- ¥1990 - 2990
- 钦诚生物
- QC-P-1705
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
12个月
- 库存：
大量
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
50T/100T
| 规格： | 50T | 产品价格： | ¥1990.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100T | 产品价格： | ¥2990.0 |
- 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
- 荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。
- 提供阳性对照，便于分析实验结果。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
规格及成分
| 成分 | 编号 | 50 次塑料袋包装 |
| 2×qPCR Mix | 90408 | 1.0 mL |
| stn 专一性引物对 | yw13891390 | 200 μL |
| stn 阳性对照， XXX 10E9 拷贝/μL |
yw13911392 |
100 μL |
| 超纯水 | 100935 | 1 mL |
| 使用手册 | 1 份 | |
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓
度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本 试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供 活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
- 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
- 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
- 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到
- 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
- 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
- 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
- NC 管中不加任何阳性对照。
- 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值， 并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
- PCR 检测（20 μL 体系）
- 在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
- 建议 PCR 反应参数（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 93℃ | 5 min |
| PCR 反应 （40 个循环） |
93℃ | 35 s |
| 55℃ | 45 s |
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合
DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再
以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
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文献和实验文献速递：传染病监控新方式？利用废水监测网络追踪腹泻病毒和痘病毒
研究背景 从2009年到2023年，世界卫生组织已经发布了7项国际关注的突发公共卫生事件（PHEIC）宣言，大约每2到3年发生一次严重的新发传染病疫情。及时和准确的监测工具对于监测病毒传播模式以及针对这些新出现的传染病采取有效的公共卫生干预措施至关重要。在新冠肺炎大流行期间，废水监测被证明是一种有效的工具，可以反映感染趋势，比传统临床监测更早地识别新出现的病毒变种。在后COVID-19时代，迫切需要在这一实际经验的基础上更广泛地应用废水监测，特别是对地方病和新出现的传染病进行更全面的监测
的5'和3’末端的有效方法，以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。经典的RACE技术是由Frohman等(1988)发明的一项技术，主要通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA5’和3’端，包括单边PCR和锚定PCR。该技术提出以来经过不断发展和完善，克服了早期技术步骤多、时间长、特异性差的缺点(Frohman等,1995:Schaefer,l995: Chen,1998: Bespalova等,1998: Matz等11999)。对传统RACE技术的改进主要是引物设计及RT-PCR
我要扩增一种逆转录病毒（)的某段基因。将这段基因用RT-PCR方法扩出来后，再用pcDNA3.1转到Hela细胞中，观察它对细胞一些表达产物具有正向还是负相的调节作用。基因序列如下： 1 atggaacaag ccccagaaga ccaagggcca cagagggagc cacacaatga atggacacta 61 gagcttttag aggagcttaa gaatgaagct gttagacatt ttcctaggat ttggctccat 121
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