- ¥1990 - 2990
- 钦诚生物
- QC-P-1327
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
12个月
- 库存：
大量
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
50T/100T
| 规格： | 50T | 产品价格： | ¥1990.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100T | 产品价格： | ¥2990.0 |
- 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
- 荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。
- 提供阳性对照，便于分析实验结果。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
规格及成分
| 成分 | 编号 | 50 次塑料袋包装 |
| 2×qPCR Mix | 90408 | 1.0 mL |
| stn 专一性引物对 | yw13891390 | 200 μL |
| stn 阳性对照， XXX 10E9 拷贝/μL |
yw13911392 |
100 μL |
| 超纯水 | 100935 | 1 mL |
| 使用手册 | 1 份 | |
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓
度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本 试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供 活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
- 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
- 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
- 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到
- 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
- 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
- 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
- NC 管中不加任何阳性对照。
- 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值， 并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
- PCR 检测（20 μL 体系）
- 在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
- 建议 PCR 反应参数（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 93℃ | 5 min |
| PCR 反应 （40 个循环） |
93℃ | 35 s |
| 55℃ | 45 s |
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合
DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再
以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
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文献和实验随着表观遗传学研究的不断深入，组蛋白修饰（甲基化，乙酰化，磷酸化…）和 DNA 甲基化修饰相关的高水平研究成果如雨后春笋般涌现，遍布 Nature, Cell 和 Science 等期刊杂志。在分子生物学的中心法则中，遗传信息从 DNA、RNA 流向蛋白。基因组 DNA 和组蛋白上都存在可逆的表观遗传学修饰，这些修饰可调控基因的表达，并由此决定细胞的状态，影响细胞的分化和发育。不禁让人疑问，那么 RNA 上也存在类似的调控机制吗？ 近两年，科学家们首次发现了一种可逆性的 RNA 甲基化—m6A
最近小编读到一篇关于 m6A 修饰的文章，完全被震撼和折服了！！思路之清晰、手段之全面、机制之详尽，让小编甘愿奉上自己的膝盖……毫不夸张的说够得上 Cell 级别（但是为什么没发 Cell 呢？），其他生物学过程/领域完全或部分套用这篇文章的思路，10 +文章妥妥的！！强烈建议收藏！！长文预警！！研究背景和待解决的科学问题癌细胞的转移是癌症致死的最主要原因，超过 90% 的癌症死亡与转移有关。EMT（上皮细胞-间质细胞转化）则是癌细胞转移过程中极其重要的一个步骤：上皮细胞在变成间充
RNA 甲基化 m6A 是如今的研究热点之一，目前主要的研究思路包括差异表达的 write，reader 和 eraser 基因分析；m6A 抗体检测全转录组甲基化水平；分析 m6A甲基化水平变化的靶基因和下游机制研究。而在 7 月 25 日的 Cell 上新发表了一篇介绍不使用 m6A 抗体的检测 mRNA m6A 水平的 Resource 文章，小编第一时间和大家分享一下。作者开发这一方法的前提是有研究报道了 MazF 能特异性的识别无修饰的 ACA 序列并发挥 RNA 酶活性在 ACA
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