- ¥1690
- 钦诚生物
- QC-P-976
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
12个月
- 库存：
大量
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
50T
- 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
- 荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。
- 提供阳性对照，便于分析实验结果。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
规格及成分
| 成分 | 编号 | 50 次塑料袋包装 |
| 2×qPCR Mix | 90408 | 1.0 mL |
| stn 专一性引物对 | yw13891390 | 200 μL |
| stn 阳性对照， XXX 10E9 拷贝/μL |
yw13911392 |
100 μL |
| 超纯水 | 100935 | 1 mL |
| 使用手册 | 1 份 | |
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓
度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本 试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供 活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
- 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
- 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
- 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到
- 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
- 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
- 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
- NC 管中不加任何阳性对照。
- 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值， 并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
- PCR 检测（20 μL 体系）
- 在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
- 建议 PCR 反应参数（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 93℃ | 5 min |
| PCR 反应 （40 个循环） |
93℃ | 35 s |
| 55℃ | 45 s |
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合
DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再
以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
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文献和实验革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～3微米。周身鞭毛，能运动，无芽孢。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素B和K，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。正常栖居条件下不致病。但若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。兼性厌氧菌。在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布在周围环境中。若在水和食品中检出此菌
大肠杆菌K12品系 Escherichia coli K—12
为大肠菌的一个系统。 1922年在斯坦福大学从恢复期白喉患者体内分离得到的。原菌株用 Es cheric－ hia coli K－ 12（λ） F 表示，后来证明是λ噬菌体熔原菌、具有 F因子的雄株。 E． L． Tatum和 J． Lederberg用 X射线照射该株分离突变体，并发现通过雌雄接合而重组的现象，遂成为用细菌和噬菌体进行分子遗传学研究的开端，并广泛地应用于许多研究上。以后许多遗传分析都是用来自该菌株的诱变株进行的。目前它是生物界对染色体图被了解得最详细
Cell cycle analysis of Escherichia coli cells
Cell cycle analysis of Escherichia coli cells C period = the time for a round of chromosome replication D period = the time between the end of a round of chromosome replication and cell division Determination of initiation age
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