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- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
1×10^6 细胞数/ml
- 相关疾病：
见说明书
- 细胞形态：
见说明书
- 器官来源：
见说明书
- 运输方式：
复苏或冻存运输
- 年限：
P4代细胞
- 生长状态：
贴壁/悬浮
培养条件：1640+10% FBS；37℃，5% CO2
生长状态：贴壁
细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备培养基；北美胎牛血清，10%；双抗1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
1. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
2. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
3. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。
3. 静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4. 贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。
5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。
6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制，
7. 因为细胞培养过程外因太多，所以我们的售后保障期为一周，超过一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。 T细胞运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；（1550）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
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文献和实验1.常用的体外诱导方法是在体外培养的成体干细胞中加人入诱导因子。诱导因子包括各种能影响细胞分化的物质，如血清、糖分、维生素、以及各种蛋白因子等。 2.日本学者Oh等首先报道，高浓度肝细胞生长因子(HGF)体外诱导大鼠骨髓细胞分化为肝细胞，并表达CK8, CK18, ALB等。 3.2002年，Schwartz等将大鼠、小鼠和人的多能成体前体细胞(MAPC)接种到铺有基质明胶或纤维连结素的培养瓶中，用60％DMEM(低糖型)+ 2% FCS培养体系培养，并加入HGF和/或成纤维细胞
)、MIllp、正常T细胞激活上调性表达因子(RANTES)、单核细胞趋化蛋白―1(MCP-1／MCAF)、MCP-2、MCP-3和1-309等；③C-X3―C亚族，只有一个成员Fractalkine；④XC亚族，目前发现有淋巴细胞趋化因子(1vmphotactin，LTN)和SCM-1日两个成员。 7．其他细胞因子 如表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子―I(1GF-1)和IGF-Ⅱ、白血
受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTKs)
growth factor, PDGF) 受体和巨噬细胞集落刺激生长因子(macrophage colony stimulating factor, M-CSF); ③胰岛素和胰岛素样生长因子-1 (insulin and insulin-like growth factor-1, IGF-1) 受体; ④神经生长因子(nerve growth factor, NGF) 受体; ⑤成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF) 受体
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