- ¥1000
- 钦诚生物
- 上海
- QC1458
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
5ug
基本信息
产品名称：MG1655/Tac-mCherry是一个大肠杆菌红色菌株。
质粒图谱
MG1655/Tac-mCherry大肠红色荧光菌株使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
MG1655/Tac-mCherry大肠红色荧光菌株注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验-CI (pH 6 .8 )50 mmol / L DTT2 % SDS （电泳级）0.1 % 溴酚蓝10 % 甘油2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白纯化材料1 ）酶溶法（1）裂解缓冲液：50 mmol / L Tris-CI (pH 8 .0 )1 mmol / L EDTA100 mmol / LNaCI（2）50 mmol / L 苯甲基磺酰氟（PMSF ）。（3）10 mg / ml 溶菌酶。（4）脱氧胆酸。（5）1 mg / ml DNase I。2 ）超声破碎法(1 )TE 缓冲
培养3 -5h ；如果表达载体的原核启动子为tac 等，则37 ℃培养细菌数小时达到对数生长期后加IPTG 至终浓度为1 mmol / L。继续培养3 -5h 。 (5 ）取上述培养液1 ml ,1000g 离心，1 min ，沉淀，加100 μL 聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后，作SDS -PAGE 检测。 2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白质纯化 1 ）细菌的裂解 常用方法有：① 高温珠磨法；② 高压匀浆；③ 超声破碎法；④ 酶溶法；⑤ 化学渗透等。前三种方法属机械破碎法，并且方法① 、②
相关专题 大肠杆菌的基因工程 基因工程让一切皆有可能 一、原理 1、 E . coli 表达系统 E . coli 是重要的原核表达体系。在重组 基因转化入E . coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。 2、 外源基因的诱导表达 提高外源基因表达 水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成
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