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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20度
- 保质期:
2年
- 供应商:
钦诚生物
- 规格:
5ug
基本信息
| 启动子: | Lac promoter,T3 promoter |
|---|---|
| 复制子: | p15A ori |
| 质粒分类: | 基因文库质粒;其它基因质粒;其它种源质粒 |
| 质粒大小: | 5198bp |
| 原核抗性: | 卡那霉素Kan(50μg/ml) |
| 克隆菌株: | DH5α等大肠杆菌 |
| 培养条件: | 37℃,有氧,LB |
| 备注: | 低拷贝 |
质粒简介
pInt质粒提供提供链霉菌噬菌体phiC31基因
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5198 bp ds-DNA circular SYN 15-AUG-2017
KEYWORDS pInt.dna
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5198
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS complement(16..1833)
/codon_start=1
/product="integrase from phage phi-C31"
/label=phage phi-C31 integrase
/translation="MDTYAGAYDRQSRERENSSAASPATQRSANEDKAADLQREVERDG
GRFRFVGHFSEAPGTSAFGTAERPEFERILNECRAGRLNMIIVYDVSRFSRLKVMDAIP
IVSELLALGVTIVSTQEGVFRQGNVMDLIHLIMRLDASHKESSLKSAKILDTKNLQREL
GGYVGGKAPYGFELVSETKEITRNGRMVNVVINKLAHSTTPLTGPFEFEPDVIRWWWRE
IKTHKHLPFKPGSQAAIHPGSITGLCKRMDADAVPTRGETIGKKTASSAWDPATVMRIL
RDPRIAGFAAEVIYKKKPDGTPTTKIEGYRIQRDPITLRPVELDCGPIIEPAEWYELQA
WLDGRGRGKGLSRGQAILSAMDKLYCECGAVMTSKRGEESIKDSYRCRRRKVVDPSAPG
QHEGTCNVSMAALDKFVAERIFNKIRHAEGDEETLALLWEAARRFGKLTEAPEKSGERA
NLVAERADALNALEELYEDRAAGAYDGPVGRKHFRKQQAALTLRQQGAEERLAELEAAE
APKLPLDQWFPEDADADPTGPKSWWGRASVDDKRVFVGLFVDKIVVTKSTTGRGQGTPI
EKRASITWAKPPTDDDEDDAQDGTEDVAA"
promoter complement(1897..1915)
/label=T3 promoter
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
primer_bind complement(1936..1952)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 1960..1976
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(1984..2014)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 2029..2050
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin 2662..3206
/direction=RIGHT
/label=p15A ori
/note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
origin of replication can be propagated in E. coli cells
that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
CDS 3801..4616
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/label=KanR
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
ORIGIN
1 gatccgggtg tctcgctacg ccgctacgtc ttccgtgccg tcctgggcgt cgtcttcgtc
61 gtcgtcggtc ggcggcttcg cccacgtgat cgaagcgcgc ttctcgatgg gcgttccctg
121 ccccctgccc gtagtcgact tcgtgacaac gatcttgtct acgaagagcc cgacgaacac
181 gcgcttgtcg tctactgacg cgcgccccca ccacgactta gggccggtcg ggtcagcgtc
241 ggcgtcttcg gggaaccatt ggtcaagggg aagcttcggg gcttcggcgg cttcaagttc
301 ggcaagccgc tcttccgccc cttgctgccg gagcgtcagc gctgcctgtt gcttccggaa
361 gtgcttcctg ccaacgggtc cgtcgtacgc gcctgccgcg cggtcttcgt acagctcttc
421 aagggcgttc agggcgtcgg cgcgctccgc aacaaggttc gcccgttcgc cgctcttctc
481 aggcgcctca gtgagcttgc cgaagcgtcg ggcggcttcc cacagaagcg ccaacgtctc
541 ttcgtcgcct tcggcgtgcc tgatcttgtt gaagatgcgt tccgcaacga acttgtcgag
601 tgccgccatg ctgacgttgc acgtgccttc gtgctgccca ggtgcggacg ggtcgaccac
661 cttccggcga cggcagcggt aagagtcctt gatcgattct tccccgcgct tcgaagtcat
721 gacggcgcca cactcgcagt acagcttgtc catggcggac agaatggctt gcccccggga
781 aagccccttg ccgcgccccc tgccgtccaa ccacgcctga agctcatacc actcagcggg
841 ctcgatgatc ggtccgcaat caagctcgac cggccggagc gtgatcgggt cgcgctgaat
901 gcggtaaccc tcaatcttcg tggtcggcgt gccgtccggc ttcttcttgt agatcacctc
961 agcggcgaag cccgcaatac gcgggtcccg aaggattcgc ataacggttg ccgggtccca
1021 ggcgcttgaa gcggtcttct tcccaatcgt ctcgccccgg gtcggcacgg cgtcagcgtc
1081 catgcgctta caaagccccg tgatgctgcc cgggtgaatg gcggcttgac tgcccggctt
1141 gaagggaagg tgtttgtgcg tcttgatctc acgccaccac caccggatta cgtcgggctc
1201 gaactcgaag ggtccggtaa ggggagtggt cgagtgcgca agcttgttga tgacgacatt
1261 gaccattcgg ccgttgcgcg tgatctcctt cgtctccgaa acaagctcga agccgtaagg
1321 cgccttcccg ccgacgtacc cgcccaattc gcgctgaagg ttcttcgtgt cgagaatctt
1381 cgccgacttc agcgaagatt ctttgtgcga cgcgtcgagc cgcataatca ggtgaatcag
1441 gtccatgacg tttccctgcc ggaagacgcc ttcctgagtg gaaacaatcg tcacgcccag
1501 ggcgagcaat tccgagacaa tcggaatcgc gtccatgacc ttcaggcgcg agaagcgcga
1561 cacgtcatag acaatgatca tgttgagccg cccggcgcgg cattcgttca ggatgcgttc
1621 gaactccggg cgctccgccg tcccgaacgc cgacgtgccc ggcgcttcgc tgaaatgccc
1681 gacgaacctg aaccggcccc cgtcgcgctc gacttcgcgc tgaaggtcgg ccgccttgtc
1741 ttcgttggcg ctacgctgtg tcgctgggct tgctgcgctc gaattctcgc gctcgcgcga
1801 ctgacggtcg taagcacccg cgtacgtgtc caccccggtc acaacccctt gtgtcatgtc
1861 ggcgacccta cgactagtga gctccagctt ttgttccctt tagtgagggt taattgcgcg
1921 cttggcgtaa tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc
1981 acacaacata cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta
2041 actcacatta attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca
2101 gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc
2161 cgctcggcca aaaaggcctg cagcaatggc aacaacgttg cgcaaactat taactggcga
2221 actacttact ctagcttccc ggcaacaatt aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc
2281 aggaccactt ctgcgctcgg cccttccggc tggctggttt attgctgata aatctggagc
2341 cggtgagcgt gggtctcgcg gtatcattgc agcactgggg ccagatggta agccctcccg
2401 tatcgtagtt atctacacga cggggagtca ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat
2461 cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag tttactcata
2521 tatactttag attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct
2581 ttttgataat ctcatgacca aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga
2641 ccccttaata agatgatctt cttgagatcg ttttggtctg cgcgtaatct cttgctctga
2701 aaacgaaaaa accgccttgc agggcggttt ttcgaaggtt ctctgagcta ccaactcttt
2761 gaaccgaggt aactggcttg gaggagcgca gtcaccaaaa cttgtccttt cagtttagcc
2821 ttaaccggcg catgacttca agactaactc ctctaaatca attaccagtg gctgctgcca
2881 gtggtgcttt tgcatgtctt tccgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc
2941 agcggtcgga ctgaacgggg ggttcgtgca tacagtccag cttggagcga actgcctacc
3001 cggaactgag tgtcaggcgt ggaatgagac aaacgcggcc ataacagcgg aatgacaccg
3061 gtaaaccgaa aggcaggaac aggagagcgc acgagggagc cgccagggga aacgcctggt
3121 atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc actgatttga gcgtcagatt tcgtgatgct
3181 tgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg gctttgccgc ggccctctca cttccctgtt
3241 aagtatcttc ctggcatctt ccaggaaatc tccgccccgt tcgtaagcca tttccgctcg
3301 ccgcagtcga acgaccgagc gtagcgagtc agtgagcgag gaagcggaat atatcctgta
3361 tcacatattc tgctgacgca ccggtgcagc cttttttctc ctgccacatg aagcacttca
3421 ctgacaccct catcagtgcc aacatagtaa gccagtatac actccgctag cgctgaggtc
3481 tgcctcgtga agaaggtgtt gctgactcat accaggcctg aatcgcccca tcatccagcc
3541 agaaagtgag ggagccacgg ttgatgagag ctttgttgta ggtggaccag ttggtgattt
3601 tgaacttttg ctttgccacg gaacggtctg cgttgtcggg aagatgcgtg atctgatcct
3661 tcaactcagc aaaagttcga tttattcaac aaagccacgt tgtgtctcaa aatctctgat
3721 gttacattgc acaagataaa aatatatcat catgaacaat aaaactgtct gcttacataa
3781 acagtaatac aaggggtgtt atgagccata ttcaacggga aacgtcttgc tcgaggccgc
3841 gattaaattc caacatggat gctgatttat atgggtataa atgggctcgc gataatgtcg
3901 ggcaatcagg tgcgacaatc tatcgattgt atgggaagcc cgatgcgcca gagttgtttc
3961 tgaaacatgg caaaggtagc gttgccaatg atgttacaga tgagatggtc agactaaact
4021 ggctgacgga atttatgcct cttccgacca tcaagcattt tatccgtact cctgatgatg
4081 catggttact caccactgcg atccccggga aaacagcatt ccaggtatta gaagaatatc
4141 ctgattcagg tgaaaatatt gttgatgcgc tggcagtgtt cctgcgccgg ttgcattcga
4201 ttcctgtttg taattgtcct tttaacagcg atcgcgtatt tcgtctcgct caggcgcaat
4261 cacgaatgaa taacggtttg gttgatgcga gtgattttga tgacgagcgt aatggctggc
4321 ctgttgaaca agtctggaaa gaaatgcata agcttttgcc attctcaccg gattcagtcg
4381 tcactcatgg tgatttctca cttgataacc ttatttttga cgaggggaaa ttaataggtt
4441 gtattgatgt tggacgagtc ggaatcgcag accgatacca ggatcttgcc atcctatgga
4501 actgcctcgg tgagttttct ccttcattac agaaacggct ttttcaaaaa tatggtattg
4561 ataatcctga tatgaataaa ttgcagtttc atttgatgct cgatgagttt ttctaatcag
4621 aattggttaa ttggttgtaa cactggcaga gcattacgct gacttgacgg gacggcggct
4681 ttgttgaata aatcgaactt ttgctgagtt gaaggatcag atcacgcatc ttcccgacaa
4741 cgcagaccgt tccgtggcaa agcaaaagtt caaaatcacc aactggtcca cctacaacaa
4801 agctctcatc aaccgtggct ccctcacttt ctggctggat gatggggcga ttcaggcctg
4861 gtatgagtca gcaacacctt cttcacgagg cagacctcag cgctcaaaga tgcaggggta
4921 aaagctaacc gcatctttac cgacaaggca tccggcagtt caacagatcg ggaagggctg
4981 gatttgctga ggatgaaggt ggaggaaggt gatgtcattc tggtgaagaa gctcgaccgt
5041 cttggccgcg acaccgccga catgatccaa ctgataaaag agtttgatgc tcagggtgta
5101 gcggttcggt ttattgacga cgggatcagt accgacggtg atatggggca aatggtggtc
5161 accatcctgt cggctgtggc acaggctgaa cgccggag
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【求助】将报告基因质粒转染到癌细胞中,是否都要共转染一个带有抗性基因的质粒来筛选阳性克隆?
lsdcfhyj 将报告基因质粒转染到癌细胞中,是否都要共转染一个带有抗性基因的质粒来筛选阳性克隆? 很多文献是这样做的,可是我认为报告基因质粒本身就带有抗生素标记基因,为什么还要共转染另一个抗性质粒?一直对着个问题很困惑,请懂这方面知识的前辈指点指点?还有就是质粒使用量的问题,我不清楚到底质粒用量与转染细胞之间到底是个什么样的比例合适,看了很多操作步骤,有的一个六孔板一孔就要用1到2微克,可是商家产品就有1微克包装的,这样的话,那用量未免
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