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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20度
- 保质期:
2年
- 供应商:
钦诚生物
- 规格:
2UG/5UG
| 规格: | 2UG | 产品价格: | ¥800.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 5UG | 产品价格: | ¥1500.0 |
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6521 bp ds-DNA circular SYN 28-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS NGFR
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6521)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 28, 2017 from Plasmid
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6521
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS complement(681..1541)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(1542..1646)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
LTR 2474..2990
/label=5' LTR
/note="5' long terminal repeat from murine embryonic stem
cell virus"
misc_feature 3054..3395
/label=MESV Psi
/note="packaging signal of murine embryonic stem cell
virus"
CDS 3462..3878
/label=gag (truncated)
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
misc_feature 3923..4475
/label=IRES
/note="internal ribosome entry site (IRES) of the
encephalomyocarditis virus (EMCV)"
misc_feature 4487..5289
/label=NGFR
/note="Homo sapiens nerve growth factor receptor (NGFR),
mRNANCBI Reference Sequence: NM_002507.3"
LTR 5389..5903
/label=3' LTR
/note="3' long terminal repeat from murine embryonic stem
cell virus"
protein_bind 6065..6081
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(6089..6119)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 6134..6155
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(6443..510)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg
61 ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc
121 tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac
181 gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac
241 ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg
301 aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga
361 agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt
421 agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag
481 cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct
541 gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg
601 atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat
661 gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc
721 tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg
781 gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg ctcaccggct
841 ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca
901 actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg
961 ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg
1021 tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc
1081 cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag
1141 ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg
1201 ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag
1261 tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat
1321 agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg
1381 atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca
1441 gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca
1501 aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat
1561 tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga atgtatttag
1621 aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc tgacgtctaa
1681 gaaaccatta ttatcatgac attaacctat aaaaataggc gtatcacgag gccctttcgt
1741 ctcgcgcgtt tcggtgatga cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc
1801 acagcttgtc tgtaagcgga tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt
1861 gttggcgggt gtcggggctg gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg
1921 caccatatgc ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcaggcgc
1981 cattcgccat tcaggctgcg caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta
2041 ttacgccagc tggcgaaagg gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt aacgccaggg
2101 ttttcccagt cacgacgttg taaaacgacg gcgcaaggaa tggtgcatgc aaggagatgg
2161 cgcccaacag tcccccggcc acggggcctg ccaccatacc cacgccgaaa caagcgctca
2221 tgagcccgaa gtggcgagcc cgatcttccc catcggtgat gtcggcgata taggcgccag
2281 caaccgcacc tgtggcgccg gtgatgccgg ccacgatgcg tccggcgtag aggcgattag
2341 tccaatttgt taaagacagg atatcagtgg tccaggctct agttttgact caacaatatc
2401 accagctgaa gcctatagag tacgagccat agataaaata aaagatttta tttagtctcc
2461 agaaaaaggg gggaatgaaa gaccccacct gtaggtttgg caagctagct taagtaacgc
2521 cattttgcaa ggcatggaaa atacataact gagaatagag aagttcagat caaggttagg
2581 aacagagaga cagcagaata tgggccaaac aggatatctg tggtaagcag ttcctgcccc
2641 ggctcagggc caagaacaga tggtccccag atgcggtccc gccctcagca gtttctagag
2701 aaccatcaga tgtttccagg gtgccccaag gacctgaaat gaccctgtgc cttatttgaa
2761 ctaaccaatc agttcgcttc tcgcttctgt tcgcgcgctt ctgctccccg agctcaataa
2821 aagagcccac aacccctcac tcggcgcgcc agtcctccga tagactgcgt cgcccgggta
2881 cccgtattcc caataaagcc tcttgctgtt tgcatccgaa tcgtggactc gctgatcctt
2941 gggagggtct cctcagattg attgactgcc cacctcgggg gtctttcatt tggaggttcc
3001 accgagattt ggagacccct gcccagggac caccgacccc cccgccggga ggtaagctgg
3061 ccagcggtcg tttcgtgtct gtctctgtct ttgtgcgtgt ttgtgccggc atctaatgtt
3121 tgcgcctgcg tctgtactag ttagctaact agctctgtat ctggcggacc cgtggtggaa
3181 ctgacgagtt ctgaacaccc ggccgcaacc ctgggagacg tcccagggac tttgggggcc
3241 gtttttgtgg cccgacctga ggaagggagt cgatgtggaa tccgaccccg tcaggatatg
3301 tggttctggt aggagacgag aacctaaaac agttcccgcc tccgtctgaa tttttgcttt
3361 cggtttggaa ccgaagccgc gcgtcttgtc tgctgcagcg ctgcagcatc gttctgtgtt
3421 gtctctgtct gactgtgttt ctgtatttgt ctgaaaatta gggccagact gttaccactc
3481 ccttaagttt gaccttaggt cactggaaag atgtcgagcg gatcgctcac aaccagtcgg
3541 tagatgtcaa gaagagacgt tgggttacct tctgctctgc agaatggcca acctttaacg
3601 tcggatggcc gcgagacggc acctttaacc gagacctcat cacccaggtt aagatcaagg
3661 tcttttcacc tggcccgcat ggacacccag accaggtccc ctacatcgtg acctgggaag
3721 ccttggcttt tgacccccct ccctgggtca agccctttgt acaccctaag cctccgcctc
3781 ctcttcctcc atccgccccg tctctccccc ttgaacctcc tcgttcgacc ccgcctcgat
3841 cctcccttta tccagccctc actccttctc taggcgccgg aattagatct ctcgaggtta
3901 acgaattccg cccccccccc taacgttact ggccgaagcc gcttggaata aggccggtgt
3961 gcgtttgtct atatgttatt ttccaccata ttgccgtctt ttggcaatgt gagggcccgg
4021 aaacctggcc ctgtcttctt gacgagcatt cctaggggtc tttcccctct cgccaaagga
4081 atgcaaggtc tgttgaatgt cgtgaaggaa gcagttcctc tggaagcttc ttgaagacaa
4141 acaacgtctg tagcgaccct ttgcaggcag cggaaccccc cacctggcga caggtgcctc
4201 tgcggccaaa agccacgtgt ataagataca cctgcaaagg cggcacaacc ccagtgccac
4261 gttgtgagtt ggatagttgt ggaaagagtc aaatggctct cctcaagcgt attcaacaag
4321 gggctgaagg atgcccagaa ggtaccccat tgtatgggat ctgatctggg gcctcggtgc
4381 acatgcttta catgtgttta gtcgaggtta aaaaaacgtc taggcccccc gaaccacggg
4441 gacgtggttt tcctttgaaa aacacgatga taatatggcc acaaccatgg acgggccgcg
4501 cctgctgctg ttgctgcttc tgggggtgtc ccttggaggt gccaaggagg catgccccac
4561 aggcctgtac acacacagcg gtgagtgctg caaagcctgc aacctgggcg agggtgtggc
4621 ccagccttgt ggagccaacc agaccgtgtg tgagccctgc ctggacagcg tgacgttctc
4681 cgacgtggtg agcgcgaccg agccgtgcaa gccgtgcacc gagtgcgtgg ggctccagag
4741 catgtcggcg ccgtgcgtgg aggccgacga cgccgtgtgc cgctgcgcct acggctacta
4801 ccaggatgag acgactgggc gctgcgaggc gtgccgcgtg tgcgaggcgg gctcgggcct
4861 cgtgttctcc tgccaggaca agcagaacac cgtgtgcgag gagtgccccg acggcacgta
4921 ttccgacgag gccaaccacg tggacccgtg cctgccctgc accgtgtgcg aggacaccga
4981 gcgccagctc cgcgagtgca cacgctgggc cgacgccgag tgcgaggaga tccctggccg
5041 ttggattaca cggtccacac ccccagaggg ctcggacagc acagccccca gcacccagga
5101 gcctgaggca cctccagaac aagacctcat agccagcacg gtggcaggtg tggtgaccac
5161 agtgatgggc agctcccagc ccgtggtgac ccgaggcacc accgacaacc tcatccctgt
5221 ctattgctcc atcctggctg ctgtggttgt gggccttgtg gcctacatag ccttcaagag
5281 gtggaacagt catcgatatc ctcgaggtca ccgcggtcta gagtcgacct gcagccaagc
5341 ttatcgataa aataaaagat tttatttagt ctccagaaaa aggggggaat gaaagacccc
5401 acctgtaggt ttggcaagct agcttaagta acgccatttt gcaaggcatg gaaaatacat
5461 aactgagaat agagaagttc agatcaaggt taggaacaga gagacagcag aatatgggcc
5521 aaacaggata tctgtggtaa gcagttcctg ccccggctca gggccaagaa cagatggtcc
5581 ccagatgcgg tcccgccctc agcagtttct agagaaccat cagatgtttc cagggtgccc
5641 caaggacctg aaatgaccct gtgccttatt tgaactaacc aatcagttcg cttctcgctt
5701 ctgttcgcgc gcttctgctc cccgagctca ataaaagagc ccacaacccc tcactcggcg
5761 cgccagtcct ccgatagact gcgtcgcccg ggtacccgtg tatccaataa accctcttgc
5821 agttgcatcc gacttgtggt ctcgctgttc cttgggaggg tctcctctga gtgattgact
5881 acccgtcagc gggggtcttt catgggtaac agtttcttga agttggagaa caacattctg
5941 agggtaggag tcgaatatta agtaatcctg actcaattag ccactgtttt gaatccacat
6001 actccaatac tcctgaaata gttcattatg gacagcgcag aaagagctgg ggagaattgt
6061 gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag
6121 cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt
6181 tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag
6241 gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg
6301 ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat
6361 caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta
6421 aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa
6481 atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact a
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文献和实验shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒,现在找到一个名为pBOR8的质粒,只有质粒简图,没找到全序列,质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq,如下图: 现有两个问题想请教各位高人 (1)该质粒能否直接作为表达载体,将外源基因克隆到该质粒上,如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点? (2)如果不能直接进行外源基因克隆和表达,那么应该
分,一是未稳定整合的,一是稳定整合的,所以开始时亮度要高。 2.为什么筛选后单克隆无荧光:首先,经过G418筛选,外源质粒不能整合入染色体的细胞死亡;其次,稳定整合的细胞外源质粒整合的位置存在位置效应,即整合于不利于外源基因表达的位置,从而使外源基因沉默;第三,我不知道你的质粒中是否加入了核糖体进入位点序列,如果有的话,研究显示该位点前后的基因表达水平存在不同,可以查查相关文献 3.有无好的办法:我认为没有,稳定转染筛选时有运气的成分,假如外源质粒恰好整合到了利于表达的染色体部位,这时筛
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法,观测外源蛋白的表达(绿色荧光蛋白),为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入
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