- ¥800 - 1500
- 钦诚生物
- 上海
- QC0517
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
2UG/5UG
| 规格： | 2UG | 产品价格： | ¥800.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 5UG | 产品价格： | ¥1500.0 |
基本信息
质粒图谱
OKSIM人源基因质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
OKSIM人源基因质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图: 现有两个问题想请教各位高人 （1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？ （2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该
分，一是未稳定整合的，一是稳定整合的，所以开始时亮度要高。 2.为什么筛选后单克隆无荧光：首先，经过G418筛选，外源质粒不能整合入染色体的细胞死亡；其次，稳定整合的细胞外源质粒整合的位置存在位置效应，即整合于不利于外源基因表达的位置，从而使外源基因沉默；第三，我不知道你的质粒中是否加入了核糖体进入位点序列，如果有的话，研究显示该位点前后的基因表达水平存在不同，可以查查相关文献 3.有无好的办法：我认为没有，稳定转染筛选时有运气的成分，假如外源质粒恰好整合到了利于表达的染色体部位，这时筛
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入
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