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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20度
- 保质期:
2年
- 供应商:
钦诚生物
- 规格:
2UG/5UG
| 规格: | 2UG | 产品价格: | ¥800.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 5UG | 产品价格: | ¥1500.0 |
基本信息
| 别名: | NM_145764.2,GST12; MGST; MGST-I |
|---|---|
| 原核抗性: | 壮观霉素Spe |
| 克隆菌株: | 大肠杆菌DH5α |
| 培养条件: | 37℃ |
质粒简介
pENTR223-MGST1是一个人源基因克隆质粒,Homo sapiens microsomal glutathione S-transferase 1 (MGST1), transcript variant 4, mRNA
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3256 bp ds-DNA circular SYN 06-FEB-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3256
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
primer_bind 537..553
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 570..668
/gene="mutant version of attL"
/label=attL1
/bound_moiety="LR Clonase(TM)"
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
misc_feature 669..1133
/label=MGST1
protein_bind complement(1135..1234)
/gene="mutant version of attL"
/label=attL2
/bound_moiety="LR Clonase(TM)"
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
promoter complement(1252..1270)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
primer_bind complement(1275..1291)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS 1722..2513
/codon_start=1
/gene="aadA"
/product="aminoglycoside adenylyltransferase (Murphy,
1985)"
/label=Spe
/note="confers resistance to spectinomycin and
streptomycin"
/translation="MREAVIAEVSTQLSEVVGVIERHLEPTLLAVHLYGSAVDGGLKPH
SDIDLLVTVTVRLDETTRRALINDLLETSASPGESEILRAVEVTIVVHDDIIPWRYPAK
RELQFGEWQRNDILAGIFEPATIDIDLAILLTKAREHSVALVGPAAEELFDPVPEQDLF
EALNETLTLWNSPPDWAGDERNVVLTLSRIWYSAVTGKIAPKDVAADWAMERLPAQYQP
VILEARQAYLGQEEDRLASRADQLEEFVHYVKGEITKVVGK"
rep_origin 2606..3194
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga
61 taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga
121 gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca
181 cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaata cgcgtaccgc
241 tagccaggaa gagtttgtag aaacgcaaaa aggccatccg tcaggatggc cttctgctta
301 gtttgatgcc tggcagttta tggcgggcgt cctgcccgcc accctccggg ccgttgcttc
361 acaacgttca aatccgctcc cggcggattt gtcctactca ggagagcgtt caccgacaaa
421 caacagataa aacgaaaggc ccagtcttcc gactgagcct ttcgttttat ttgatgcctg
481 gcagttccct actctcgcgt taacgctagc atggatgttt tcccagtcac gacgttgtaa
541 aacgacggcc agtcttaagc tcgggccccc aaataatgat tttattttga ctgatagtga
601 cctgttcgtt gcaacaaatt gatgagcaat gcttttttat aatgccaact ttgtacaaaa
661 aagttggcat ggttgacctc acccaggtaa tggatgatga agtattcatg gcttttgcat
721 cctatgcaac aattattctt tcaaaaatga tgcttatgag tactgcaact gcattctata
781 gattgacaag aaaggttttt gccaatccag aagactgtgt agcatttggc aaaggagaaa
841 atgccaagaa gtatcttcga acagatgaca gagtagaacg tgtacgcaga gcccacctga
901 atgaccttga aaatattatt ccatttcttg gaattggcct cctgtattcc ttgagtggtc
961 ccgacccctc tacagccatc ctgcacttca gactatttgt cggagcacgg atctaccaca
1021 ccattgcata tttgacaccc cttccccagc caaatagagc tttgagtttt tttgttggat
1081 atggagttac tctttccatg gcttacaggt tgctgaaaag taaattgtac ctgtacccaa
1141 ctttcttgta caaagttggc attataagaa agcattgctt atcaatttgt tgcaacgaac
1201 aggtcactat cagtcaaaat aaaatcatta tttgccatcc agctgatatc ccctatagtg
1261 agtcgtatta catggtcata gctgtttcct ggcagctctg gcccgtgtct caaaatctct
1321 gatgttacat tgcacaagat aaaaatatat catcatgcct cctctagacc agccaggaca
1381 gaaatgcctc gacttcgctg ctgcccaagg ttgccgggtg acgcacaccg tggaaacgga
1441 tgaaggcacg aacccagtgg acataagcct gttcggttcg taagctgtaa tgcaagtagc
1501 gtatgcgctc acgcaactgg tccagaacct tgaccgaacg cagcggtggt aacggcgcag
1561 tggcggtttt catggcttgt tatgactgtt tttttggggt acagtctatg cctcgggcat
1621 ccaagcagca agcgcgttac gccgtgggtc gatgtttgat gttatggagc agcaacgatg
1681 ttacgcagca gggcagtcgc cctaaaacaa agttaaacat catgagggaa gcggtgatcg
1741 ccgaagtatc gactcaacta tcagaggtag ttggcgtcat cgagcgccat ctcgaaccga
1801 cgttgctggc cgtacatttg tacggctccg cagtggatgg cggcctgaag ccacacagtg
1861 atattgattt gctggttacg gtgaccgtaa ggcttgatga aacaacgcgg cgagctttga
1921 tcaacgacct tttggaaact tcggcttccc ctggagagag cgagattctc cgcgctgtag
1981 aagtcaccat tgttgtgcac gacgacatca ttccgtggcg ttatccagct aagcgcgaac
2041 tgcaatttgg agaatggcag cgcaatgaca ttcttgcagg tatcttcgag ccagccacga
2101 tcgacattga tctggctatc ttgctgacaa aagcaagaga acatagcgtt gccttggtag
2161 gtccagcggc ggaggaactc tttgatccgg ttcctgaaca ggatctattt gaggcgctaa
2221 atgaaacctt aacgctatgg aactcgccgc ccgactgggc tggcgatgag cgaaatgtag
2281 tgcttacgtt gtcccgcatt tggtacagcg cagtaaccgg caaaatcgcg ccgaaggatg
2341 tcgctgccga ctgggcaatg gagcgcctgc cggcccagta tcagcccgtc atacttgaag
2401 ctagacaggc ttatcttgga caagaagaag atcgcttggc ctcgcgcgca gatcagttgg
2461 aagaatttgt ccactacgtg aaaggcgaga tcaccaaggt agtcggcaaa taaccctcga
2521 gccacccatg accaaaatcc cttaacgtga gttacgcgtc gttccactga gcgtcagacc
2581 ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct
2641 tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa
2701 ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gtccttctag
2761 tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc
2821 tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg
2881 actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca
2941 cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagcatt
3001 gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg
3061 tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc
3121 ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc
3181 ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc
3241 cttttgctca catgtt
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文献和实验浓度不同,两种引物浓度相差 100 倍。在最初 20 各循环中,主要产物是双链 DNA。当低浓度引物被耗尽后,高浓度引物引导的 PCR 就会产生大量单链 DNA,单链 DNA 可用于序列测定。 三、主要试剂 1. DNA 模板(1ng/μL)(质粒 R-pGEX-4T-1,R 指代外源基因) 2. 2.5mmol/LdNTP (TaKaRa) 3. 10×PCR 缓冲液(TaKaRa) 4. 25mmol/L MgCl 2 (TaKaRa) 5. 引物 1、引物 2(5pmol/μL) 引物
的上下游两端的序列连接起来,从而实现了目的基因的敲除。再如,可为细胞提供一个修复的模板质粒,这样细胞就可按照提供的模板在修复过程中引入片段插入或定点突变。也可对受精卵细胞进行基因编辑,并将其导入代孕母体中,可实现基因编辑动物模型的构建。
,近年来人们较多采用此方法克隆基因启动子。苏宁等根据已报道的水稻叶绿体16SrRNA启动子基因序列设计5'启动子序列的引物,以水稻叶绿体DNA为模板,PCR扩增出16SrRNA基因5'启动子区的片段,酶切克隆到pSK的SacI和SphI位点,构建测序载体质粒pZ16S,进行序列测定,结果表明所克隆的片段长为144bp,含有SD序列。同源比较结果表明,所克隆的片段与水稻叶绿体16SrRNA启动子序列具有100%的同源性。上述的PCR方法简便、快捷、操作简单,是人们较为广泛使用的技术。1.3 环状PCR
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